dna聚合酶无法从头合成与模板链匹配的新链,只能在模板链上以一段短小(一般几bp至十几bp不等)但与模板链配对紧密的链作为起始链,沿5->3方向合成新链,这个过程我们称之为“延伸”。
起始链的合成在真核细胞体内是由rna聚合酶(对就是转录时用的那个)代劳的,此酶具有从头合成链的能力(即“起始”能力)之后dna合酶以这段短的rna链为起始,不断延伸合成新链。这段短rna链起到了“引发”新链合成的功能,因此也被称作“引物”。在原核生物中,dna分子以环状形式存在,随便切个口就可以以切口3端作为起始开始延伸了 (当然人家细菌还是有操守的,为了切得方便还是专门设置了一个复制起始位点)。
在dna新链延伸完毕后,真核细胞需要将作为起始链的rna链替换为dna,这个过程依据位置不同在细胞里大致有两种处理方式:如果引物在dna链一端,别说了直接上端粒合酶吧;若引物位于dna链中间,则是由同样具有dna延伸活性(但速度比前述的dna合酶慢许多)并兼具5->3方向水解能力(这样才能把引物rna链切掉)的另一种dna合酶代劳,*用dna连接酶将替换链和新链之间的小缺口填补上。原核生物等低等生物中由于有滚环复制θ复制等特殊机制存在,复制流程的细节上会有差异,并且会多一步切割并环化dna分子的步骤,不过体机制大同小异。
可见,在生物体内的dna复制过程是复杂的,需要多种酶先后参与进来,并且对于dna的延伸来说,引物是必不可少的。
在体外的pcr体系中,由于:
1、出于成本考量,暂时没有发现并优化在pcr工作温度(55°C--95°C+)下仍具有很好活性的rna合酶、dna合酶(替换引物用)、dna链接酶
2、出于现有工艺考量,从头合成设计好的dna短引物是相对简单快捷的技术,并且可以省略引物的替换步骤
因此使用短dna作为引物是必要且*效的选择。