实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
操作细节技巧：
1、加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
2、使用干净的塑料容器配置洗涤液。
3、按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
4、底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
5、洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
6、使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
7、实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
8、试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
9、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
