操作要点:
1)标本的采取和保存:可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本;
2)试剂的准备:所需试剂、蒸馏水、去离子水、自配的缓冲液;
3)加样:一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。
4)保温:ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育。
5)洗涤:洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外,手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种。
6)显色和比色:显色是ELISA中的*一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体,然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。仪器准备为酶标仪。
7)结果判断:分定性判定和定量判定。
具有如下优点:
一、高效、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、非常好,节省实验经费。
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产品名称 |
大鼠内脂素进口ELISA试剂盒 |
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英文名称 |
Rat Visfatin ELISA Kit |
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检测范围 |
1.5ng/mL~48ng/mL |
规格:48T/96T
特点:灵敏性高、特异性强、重复性好
用途:科研实验等领域科学研究,不得用于临床诊断
运输:快递(根据客户要求,选择具体的运输方式)
试剂盒种属:羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。
待检样本:体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等等。
测定步骤:
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样,不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴
1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
试剂和样本的控制方法:
一、试剂
1.试剂的选择:*明确要求要采用批批的形式对ELISA试剂严格把关,我司严格按照*标准进行生产,已获得*承认的“三证”,每一个产品都有对应的生产批号,只要客户提前下单,我们就能为您提供新批次的产品,不必担心会有过期的试剂。我司的试剂,值得您选择。
2.试剂的准备:先将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20-30 min后,再进行测定,使试剂盒在使用前与室温平衡,这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度,以满足后面的测定需求。
二、样本
1.内源性干扰因素:包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等;
类风湿因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②标本用联有热变性IgG的固相吸附剂处理;
③检测抗原时,可用加入到标本稀释液中使RF降解;
补体的控制方法:
①用EDTA稀释标本;
②56℃ 30 min加热血清使C1q灭活;
2.外源性干扰因素:包括标本溶血、细菌污染、保存时间过长或凝固不全等;
控制方法:采血时规范操作,采集的血液勿用力震荡,以防溶血;收集标本时采用无菌试管,经检测后再低温冻存;保存时间不宜过久,检测时尽量采用新鲜标本;对于凝固不全的血标本可适当加入抗凝剂,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再离心分离血清。

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