流感病毒N亚型分型荧光PCR法检测试剂盒

特点：产品仅用于科研
◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；
◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；
◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；
◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

参数规格：

产品名称	流感病毒N亚型分型荧光PCR法检测试剂盒
规格	50T
货号	FS-P63224

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
       引物1（10pM）               2μl
       引物2（10PM）              2μl
       Taq酶（2U/μl）            1μl
 1 μl         DNA模板（50ng-1μg/μl）
      加ddH2O至               50 μl
    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，总线后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。总线好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用总线高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

杂交瘤(B类);Z51B3C10H12A12G2F7B5粒，英文名或英文缩写：Lead，级别：AR，98%，规格：10克

CD86 Others Mouse 小鼠 CD86 / B7-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-羌基本加醋单铵盐 cMMONIUM ScLICYLcTq 3192-34-8

人结膜成纤维细胞cDNAHConF cDNAN-苄氧羰基-L-缬酸，英文名或英文缩写：N-CBZ-L-Valine，级别：BR，98.5%，规格：5克

IL6ST Others Rat 大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 人细胞裂解液 (阳性对照) 优巴拉尔，英文名或英文缩写：Euparal，级别：AR，95%，规格：25克

293 人胚肾细胞(2-)-2-基乙磺酸)
L-赖氨酸甲酯盐酸盐  L-Lysine methyl ester di  质量规格：0.98 人甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集素(MBP/MBL)试剂盒 Human MBP/MBL ELISA Kit

L-蛋氨酸甲酯盐酸盐  L-Mine Methyl Ester   质量规格：>98% 人甘露糖凝集素受体(MBLR)ELISA检测试剂盒HumanMannmabindinglectieceptor,MBLRELISAKit 96T/48T

胆硫酸酯钠盐   cholesteryl sulfate  质量规格：>98%,BR 人甘露糖凝集素受体(MBLR)试剂盒 Human Mannma binding lectin receptor,MBLR ELISA Kit

O-叔丁基-L-丝氨酸甲酯盐酸盐  O-tert-Butyl-L-serine methyl ester   质量规格：0.98 人甘露糖受体(MR)ELISA检测试剂盒Humanmannosereceptor,MRELISAKit 96T/48T

L-缬氨酸甲酯盐酸盐  L-Valine methyl ester    质量规格：>98%,BR 人甘露糖受体(MR)试剂盒 Human mannose receptor,MR ELISA Kit

L-缬氨酰胺盐酸盐  L-Valinamide    质量规格：>98%,BR 人甘肽/甘素(GAL)ELISA检测试剂盒Humangalanin,GALELISAKit 96T/48T

半胱胺盐酸盐  Cysteamine   质量规格：>99%,BR 人甘油-3 - 0酸脱氢酶(GAPDH/G3PDH)试剂盒 Human glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH/G3PDH ELISA kit

甘氨酰胺盐酸盐  Glycinamide   质量规格：0.98 人甘油二酯(DAG)试剂盒 Human diacylglycerol,DAG ELISA kit

L-羟脯氨酸甲酯盐酸盐  L-4-Hydroxyproline methyl ester   质量规格：>98%,BR 人甘油三酯(TG)试剂盒 Human iglyceride,TG ELISA Kit

D-亮氨酸甲酯盐酸盐  D-Leucine methyl ester   质量规格：>98%(T) 人肝X受体α(LXRα)试剂盒 Human Liver X Receptor α,LXRα ELISA Kit
人甘露糖(Mannose)ELISA检测试剂盒HumanMannose 96T/48T N-苄基甘氨酸盐酸盐  Bzl-Gly-OH·HCl  质量规格：0.98

人甘露糖(Mannose)试剂盒 Human Mannose ELISA Kit 甘氨酸苄酯盐酸盐  Glycine benzyl ester   质量规格：0.98

人甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集素(MBP/MBL)ELISA检测试剂盒HumanMannmabindingprotein/mannanbindinglectin,MBP/MBL 96T/48T L-异亮氨酸叔丁酯盐酸盐  L-Isoleucine t-butyl ester   质量规格：>98%,BR

人甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集素(MBP/MBL)试剂盒 Human MBP/MBL ELISA Kit L-赖氨酸甲酯盐酸盐  L-Lysine methyl ester di  质量规格：0.98

人甘露糖凝集素受体(MBLR)ELISA检测试剂盒HumanMannmabindinglectieceptor,MBLR 96T/48T L-蛋氨酸甲酯盐酸盐  L-Mine Methyl Ester   质量规格：>98%

人甘露糖凝集素受体(MBLR)试剂盒 Human Mannma binding lectin receptor,MBLR ELISA Kit 胆硫酸酯钠盐   cholesteryl sulfate  质量规格：>98%,BR

人甘露糖受体(MR)ELISA检测试剂盒Humanmannosereceptor,MR 96T/48T O-叔丁基-L-丝氨酸甲酯盐酸盐  O-tert-Butyl-L-serine methyl ester   质量规格：0.98

人甘露糖受体(MR)试剂盒 Human mannose receptor,MR ELISA Kit L-缬氨酸甲酯盐酸盐  L-Valine methyl ester    质量规格：>98%,BR

流感病毒N亚型分型荧光PCR法检测试剂盒人甘肽/甘素(GAL)ELISA检测试剂盒Humangalanin,GAL 96T/48T L-缬氨酰胺盐酸盐  L-Valinamide    质量规格：>98%,BR

人甘油-3 - 0酸脱氢酶(GAPDH/G3PDH)试剂盒 Human glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH/G3PDH ELISA kit 半胱胺盐酸盐  Cysteamine   质量规格：>99%,BR
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，*终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。