乳酸杆菌LB荧光-PCR法检测试剂盒

产品仅用于科研参数规格：

产品名称	乳酸杆菌LB荧光-PCR法检测试剂盒
规格	50T
货号	FS-P64006

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
特点：
◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；
◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；
◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；
◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，*终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
       引物1（10pM）               2μl
       引物2（10PM）              2μl
       Taq酶（2U/μl）            1μl
 1 μl         DNA模板（50ng-1μg/μl）
      加ddH2O至               50 μl
    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，总线后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。总线好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用总线高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Hut-102(人皮肤T瘤细胞) 5×106cells/瓶×2(R)-(+)-4'-羟苯基卡维地洛质量规格：美国进口(R)-(+)-4'-Hydroxyphenyl Carvedilol

Promocell C-22020 Endothelial Cell GrowthMedium MV, 内皮细胞生长培养基MV(即用型) 500ml4'-苄氧基卡维地洛质量规格：美国进口4'-Benzyloxy Carvedilol

人食道上皮细胞裂解物HEEpiCL卡维地洛-甲基-d3质量规格：美国进口Carvedilol-methyl-d3

HEXA Others Human 人 Hexosaminidase A / HEXA Subunit A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 卡维地洛β-D-葡萄糖苷酸(mixture of diasteromers)质量规格：美国进口Carvedilol β-D-Glucuronide (mixture of diasteromers)

人结直肠腺癌细胞;HCT-15 [HCT15](S)-(-)-1-苯乙醇(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)(S)-(-)-2-Methyl-1-butanol
羟乙基磺酸铵盐  AHES  质量规格：>99% 小鼠蛋白激酶抑制因子β(PKIβ)ELISA试剂盒 ，英文名： PKIβ ELISA Kit

羟乙基磺酸  HES  质量规格：>80%,粘状液体 小鼠蛋白激酶抑制因子γ(PKIγ)ELISA试剂盒 ，英文名： PKIγ ELISA Kit

DIPSO.Na;3-[N-N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸单钠盐  DIPSO Mono  质量规格：>98% 小鼠蛋白聚糖4(PRG4)ELISA试剂盒 ，英文名： PRG4 ELISA Kit

DIPSO; 3-[N-N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸   DIPSO  质量规格：>99% 小鼠蛋白酪酸0酸酶受体H(PTPRH)ELISA试剂盒 ，英文名： PTPRH ELISA Kit

2,3-二巯基丙磺酸钠  DMPS  质量规格：>95%,一水合物 小鼠蛋白酪酸0酸酶受体O(PTPRO)ELISA试剂盒 ，英文名： PTPRO ELISA Kit

CHPS-Na；3-氯-2-羟基丙磺酸钠  CHPS-Na  质量规格：>98.5% 小鼠蛋白酶3(PR3)ELISA试剂盒 ，英文名： PR3 ELISA Kit

SBES；2-乙基磺酸钠   2-bromoethanesulphonate  质量规格：>98.5% 小鼠蛋白酶激活受体2(PAR2)ELISA试剂盒 ，英文名： PAR2 ELISA Kit

BICINE；N,N-二羟乙基甘氨酸  BICINE  质量规格：>99% 小鼠蛋白酶激活受体3(PAR3)ELISA试剂盒 ，英文名： PAR3 ELISA Kit

BES  salt; N,N-二(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸钠  BES  Salt  质量规格：>99% 小鼠蛋白质二硫键异构酶(PDI)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

BES free acid; N,N-(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸  BES free acid  质量规格：>99% 小鼠蛋酸酶(PP)ELISA检测试剂盒MouseProteinPhosphatase,PPELISAKit 96T/48T
小鼠蛋白激酶Cη(PKCη)ELISA试剂盒 ，英文名： PKCη ELISA Kit PI3K 抑制剂  LY294002  质量规格：>98.5%,进分

小鼠蛋白激酶D1(PRKD1)ELISA试剂盒 ，英文名： PRKD1 ELISA Kit 羟乙基磺酸钠  SHES  质量规格：>98.5%

小鼠蛋白激酶N2(PKN2)ELISA试剂盒 ，英文名： PKN2 ELISA Kit 羟乙基醋酸钾  PHES  质量规格：>98.5%

小鼠蛋白激酶抑制因子β(PKIβ)ELISA试剂盒 ，英文名： PKIβ ELISA Kit 羟乙基磺酸铵盐  AHES  质量规格：>99%

小鼠蛋白激酶抑制因子γ(PKIγ)ELISA试剂盒 ，英文名： PKIγ ELISA Kit 羟乙基磺酸  HES  质量规格：>80%,粘状液体

小鼠蛋白聚糖4(PRG4)ELISA试剂盒 ，英文名： PRG4 ELISA Kit DIPSO.Na;3-[N-N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸单钠盐  DIPSO Mono  质量规格：>98%

小鼠蛋白酪酸0酸酶受体H(PTPRH)ELISA试剂盒 ，英文名： PTPRH ELISA Kit DIPSO; 3-[N-N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸   DIPSO  质量规格：>99%

小鼠蛋白酪酸0酸酶受体O(PTPRO)ELISA试剂盒 ，英文名： PTPRO ELISA Kit 2,3-二巯基丙磺酸钠  DMPS  质量规格：>95%,一水合物

小鼠蛋白酶3(PR3)ELISA试剂盒 ，英文名： PR3 ELISA Kit CHPS-Na；3-氯-2-羟基丙磺酸钠  CHPS-Na  质量规格：>98.5%

小鼠蛋白酶激活受体2(PAR2)ELISA试剂盒 ，英文名： PAR2 ELISA Kit SBES；2-乙基磺酸钠   2-bromoethanesulphonate  质量规格：>98.5%
乳酸杆菌LB荧光-PCR法检测试剂盒注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。