猪流行性腹泻病毒PEDV定性RT-PCR法检测试剂盒

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

特点：产品仅用于科研
◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；
◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；
◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；
◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

参数规格：

产品名称	猪流行性腹泻病毒PEDV定性RT-PCR法检测试剂盒
规格	50T
货号	FS-P64217

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
       引物1（10pM）               2μl
       引物2（10PM）              2μl
       Taq酶（2U/μl）            1μl
 1 μl         DNA模板（50ng-1μg/μl）
      加ddH2O至               50 μl
    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，总线后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。总线好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用总线高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

B16BL6细胞，小鼠色素瘤细胞 VERO C1008 (E6)(非洲绿猴肾细胞) EB病毒转化的人B细胞;KM932人参皂甙Rb2，英文名或英文缩写：Ginsenoside Rb2，级别：AR，99.5%，规格：100克

CCL15 Protein Human 重组人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113， His 标签)邻甲基对苯盐 2,5-Diamino sulfate,97% 615-50-9 25G 通用试剂

SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人细胞裂解液 (阳性对照) 过氧化月桂酰; Lcuroyl pqroxidq;Dodqccnoyl pqroxidq;clpqrox C; 102-74-8

人耐VP16绒癌细胞株;JEG-3/VP16片shēng huà shì jì容量：25克

CD68 Others Human 人 CD68 / Macrosialin / Gp110 (aa 1-319) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 红 3BNA
血根碱 HPLC≥98% 20mg HumanSurfactaProteinA，SP-AELISAKit人表面活性蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒规格：96T/48T

血竭素 HPLC≥98% 20mg Humansystemiclupuserythematosus,SLEELISAKit人系统性红斑狼疮(SLE)ELISA试剂盒规格：96T/48T

血竭素高氯酸盐 HPLC≥98% 20mg humanUDP-glucoseceramideglucosylansferaseELISAKit人尿苷二0酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)ELISA试剂盒规格：96T/48T

鸦胆子素D HPLC≥98% 20mg HumanUlaSensitivegrowthhormone,US-GHELISAKit人敏生长激素(US-GH)ELISA试剂盒规格：96T/48T

鸭脚树叶碱 HPLC≥98% 5mg HumanUlaSensitiveProstateSpecificAigen,PSAUSELISAKit人敏前列腺特异性抗原(PSA-US)ELISA试剂盒规格：96T/48T

雅姆皂苷元 HPLC≥98% 10mg humanulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit人高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)ELISA试剂盒规格：96T/48T

亚苯甲酰基脲 HPLC≥98% 20mg HumanUlasensitivityi-iodothyronine，u-T3ELISAKit人高敏三甲状腺原氨酸(u-T3)ELISA试剂盒规格：96T/48T

亚麻木酚素 HPLC≥98% 20mg humanUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit 人高敏甲状腺素(u-T4)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

亚麻酸乙酯 GC≥98% 20mg humanUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit人高敏甲状腺素(u-T4)ELISA试剂盒规格：96T/48T

亚油酸 GC≥98% 0.2ml HumanUreaplasmaurealyticumaibody,UU-AbELISAKit 人解脲脲原体抗体(UU-Ab)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
HumanSurfactaProteinA，SP-A人表面活性蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒规格：96T/48T 血根碱 HPLC≥98% 20mg

Humansystemiclupuserythematosus,SLE人系统性红斑狼疮(SLE)ELISA试剂盒规格：96T/48T 血竭素 HPLC≥98% 20mg

humanUDP-glucoseceramideglucosylansferase人尿苷二0酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)ELISA试剂盒规格：96T/48T 血竭素高氯酸盐 HPLC≥98% 20mg

HumanUlaSensitivegrowthhormone,US-GH人敏生长激素(US-GH)ELISA试剂盒规格：96T/48T 鸦胆子素D HPLC≥98% 20mg

HumanUlaSensitiveProstateSpecificAigen,PSAUS人敏前列腺特异性抗原(PSA-US)ELISA试剂盒规格：96T/48T 鸭脚树叶碱 HPLC≥98% 5mg

humanulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSH人高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)ELISA试剂盒规格：96T/48T 雅姆皂苷元 HPLC≥98% 10mg

HumanUlasensitivityi-iodothyronine，u-T3人高敏三甲状腺原氨酸(u-T3)ELISA试剂盒规格：96T/48T 亚苯甲酰基脲 HPLC≥98% 20mg

humanUlasensitivityThyroxine,u-T4 人高敏甲状腺素(u-T4)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 亚麻木酚素 HPLC≥98% 20mg

humanUlasensitivityThyroxine,u-T4人高敏甲状腺素(u-T4)ELISA试剂盒规格：96T/48T 亚麻酸乙酯 GC≥98% 20mg

HumanUreaplasmaurealyticumaibody,UU-Ab 人解脲脲原体抗体(UU-Ab)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 亚油酸 GC≥98% 0.2ml
猪流行性腹泻病毒PEDV定性RT-PCR法检测试剂盒定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，*终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。