生化法检测试剂盒:分光光度法、微量法、比色法、酶标法、高液相色谱法,研发,*技术研发团队,操作简便快捷,规格合理、系列成套,价格合理,是广大科研工作者的好选择,详细产品咨询:
产品名称:丙酮酸脱氢酶 PDH测试盒
检测方法:可见分光光度法
规格: 50管/48样
样品制备:
1). 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品,体积可达2.000ml。
2). 过滤混浊溶液。
3). 除去样品中的CO 2 (果糖含量测试盒说明书过过滤)。
4 ). 果糖含量测试盒说明书过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。
5 ). 调整酸性浅色样品的PH值至8.0,孵育约15分钟。
6 ). 用空白样品做对照测定有色样品(如有必要调整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。
8 ). 压碎、搅匀固体或半固体样品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。
10).含脂肪的样品用热水提取。
需自备的仪器和用品:
液相色谱仪、示差折光检测器、低速离心机、溶剂抽滤装置、超声波清洗器、针头式过滤器(水系,50个,0.22μm)、滤膜(水系1个,0.45μm)、钙柱(Carbomix Ca-NP10,7.8 ×300 mm)、可调式移液器、样品瓶(50个,2mL)、纯水。
通用规则:
1、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
2、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
4、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。
5、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
6、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
7、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
8、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的,要在临用前现配。
实验结果判断我有妙招:
1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。
4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:
① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。
② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。
③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。
④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。
⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。
大鼠 聚蛋白多糖酶试剂盒 ADAMTSs试剂盒 Pathogenic Role of Aggrecanase 0.5 16 pmol/L 0.1
大鼠 抗肺泡基底膜抗体试剂盒 ABM-Ab试剂盒 ABM-Ab 0.25 8 ng/mL 0.1
大鼠 抗核膜糖蛋白210抗体试剂盒 gp210试剂盒 Anti-glucoprotein 210 5 160 ng/mL 1
大鼠 抗核小体抗体IgG试剂盒 AnuA-IgG试剂盒 anti-nucleosome antibody IgG 1.5 48 IU/mL 0.1
大鼠 抗甲状腺过氧化物酶抗体试剂盒 TPO-Ab试剂盒 anti-Thyroid-Peroxidase antibody 0.5 16 U/mL 0.1
大鼠 抗甲状腺球蛋白抗体试剂盒 ATGA;TGAB试剂盒 Anti-thyroid-globulin antibody 3.75 120 IU/mL 0.1
大鼠 抗酒石酸酸性磷酸酶试剂盒 TRAP试剂盒 tartrate-resistant acid phosphatase 1.5 48 U/L 0.1
大鼠 抗酒石酸酸性磷酸酶5b试剂盒 TRACP-5b试剂盒 tartrate-resistant acid phosphatase 5b 0.25 8 U/L 0.1
大鼠 抗内皮细胞抗体试剂盒 AECA试剂盒 anti-endothelial cell antibody 62.5 2000 pg/mL 10
大鼠 抗凝血酶Ⅲ试剂盒 AT-Ⅲ试剂盒 Anti-Thrombin Ⅲ 0.75 24 U/mL 0.1
大鼠 抗平滑肌抗体试剂盒 ASMA试剂盒 Anti-smooth muscle antibody 6.25 200 IU/L 1
丙酮酸脱氢酶 PDH测试盒大鼠 抗神经节苷脂抗体试剂盒 GM1试剂盒 anti-ganglioside antibody 2.5 80 ng/mL 0.1
大鼠 抗双链DNA抗体;天然DNA抗体试剂盒 dsDNA试剂盒 anti-double stranded DNA 1.5 48 IU/mL 0.1
大鼠 抗胰岛素受体抗体试剂盒 AIRA试剂盒 anti-insulin receptor antibody 1.5 48 U/mL 0.1
大鼠 可溶性CD36试剂盒 sCD36试剂盒 Soluble Cluster of differentiation 36 0.5 16 ng/mL 0.1
大鼠 可溶性CD40配体试剂盒 sCD40L试剂盒 Soluble Cluster of differentiation 40 ligand 0.5 16 ng/mL 0.1
大鼠 可溶性E选择素试剂盒 sE-selectin试剂盒 soluble E-selectin 2.5 80 ng/mL 0.1
大鼠 可溶性P选择素试剂盒 sP-selectin试剂盒 sP-selectin 6.25 200 ng/mL 1
大鼠 可溶性凋亡相关因子试剂盒 sFAS试剂盒 soluble Factor-related Apoptosis 1.25 40 ng/mL 0.1
大鼠 可溶性凋亡相关因子配体试剂盒 sFASL试剂盒 soluble Factor-related Apoptosis ligand 6.25 200 pg/mL 1
大鼠 可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1试剂盒 sLOX-1试剂盒 Soluble Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1 10 320 pg/mL 1
大鼠 可溶性髓系细胞触发受体-1试剂盒 sTREM-1试剂盒 Soluble triggering Receptor Expresses on Myeloid Cells-1 7.5 240 pg/mL 1
操作步骤(仅供参考):
1.配制65mM H2O2基液:本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2浓度约为1M。由于过 氧化氢不是非常稳定,使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。把浓度约为1M的H2O2基液用本试剂盒提供的CAT Assay buffer稀释100倍,使H2O2基液中的H2O2浓度约为10mM。
2.准备样品:
a,细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行裂解,可以采用Leagene Western及IP 细胞裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-70℃冻存,用于CAT的检测。
b,血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,用生理盐水10倍稀释后, 可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-70℃冻存,用于CAT的检测。
c,全血样品:收集适量的全血(whole blood)至一抗凝管内,颠倒混匀。取100μl全 血冻融一次,用CAT Assay buffer1000倍后进行CAT检测。
d,血液中的红细胞裂解液:用抗凝管收集血液,颠倒混匀。取至少500μl全血4℃ 3000g离心5min,弃上清,沉淀用预冷的生理盐水洗涤3次。
,高活性样品:如果样品中含有较高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀释。
f,(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。
3、 CAT检测:按照下表设置空白管、自身对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并 注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测能设置平行孔。
4、分光光度计检测405nm处吸光度,分光光度计比色杯光径0.5cm。如果没有分光光度计,亦可用酶标仪检测,但如果有条件,尽量采用分光光度计检测。蒸馏水调零,读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。