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英文简称:GT39细胞1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为玻璃制造，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验事项：
1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2. 加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，使用多道移液器加样。
3. 孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5. 试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6. 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。
培养步骤：对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
癌抗原1(CAGE1)ELISA试剂盒； CAGE1 ELISA Kit
癌/睾丸抗原62(CTAG62)ELISA试剂盒； CTAG62 ELISA Kit
癌/睾丸抗原2(CTAG2)ELISA试剂盒； CTAG2 ELISA Kit
阿片肽(OP)ELISA试剂盒； OP ELISA Kit
阿米洛利敏感钠离子通道蛋白1γ(SCNN1γ)ELISA试剂盒； SCNN1γ ELISA Kit
阿米洛利敏感钠离子通道蛋白1β(SCNN1β)ELISA试剂盒； SCNN1β ELISA Kit
阿米洛利敏感钠离子通道蛋白1α(SCNN1α)ELISA试剂盒； SCNN1α ELISA Kit
τ-微管蛋白激酶2(tTBK2)ELISA试剂盒； tTBK2 ELISA Kit
τ-蛋白激酶1(τPK1)ELISA试剂盒； τPK1 ELISA Kit
δ样蛋白4(δLL4)ELISA试剂盒； δLL4 ELISA Kit
δ样蛋白1同源物(δLK1)ELISA试剂盒； δLK1 ELISA Kit
δ-促睡眠肽(δSIP)ELISA试剂盒； δSIP ELISA Kit
γ-谷氨酰转移酶1(γGT1)ELISA试剂盒； γGT1 ELISA Kit
γ-谷氨酰水解酶(γGH)ELISA试剂盒； γGH ELISA Kit
γ-谷氨酰基转氨酶7(γGT7)ELISA试剂盒； γGT7 ELISA Kit
γ-谷氨酰基转氨酶6(γGT6)ELISA试剂盒； γGT6 ELISA Kit
γ-谷氨酰基转氨酶5(γGT5)ELISA试剂盒； γGT5 ELISA Kit
γ-谷氨酰基转氨酶3(γGT3)ELISA试剂盒； γGT3 ELISA Kit
γ-谷氨酰基转氨酶2(γGT2)ELISA试剂盒； γGT2 ELISA Kit
γ-谷氨酰环化转移酶(γGCT)ELISA试剂盒； γGCT ELISA Kit
γ-促脂解激素(γLPH)ELISA试剂盒； γLPH ELISA Kit
γ-氨基丁酸(γABA)ELISA试剂盒； γABA ELISA Kit
β-血小板球蛋白(βTG)ELISA试剂盒； βTG ELISA Kit
β细胞素(βTC)ELISA试剂盒； βTC ELISA Kit
β-位淀粉样前体蛋白裂解酶2(βACE2)ELISA试剂盒； βACE2 ELISA Kit
β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1(βACE1)ELISA试剂盒； βACE1 ELISA Kit
β-羟丁酸(OHβ)ELISA试剂盒； OHβ ELISA Kit
β-内啡肽(βEP)ELISA试剂盒； βEP ELISA Kit
β-骨胶原交联(βCTx)ELISA试剂盒； βCTx ELISA Kit
β-促脂素(βLPH)ELISA试剂盒； βLPH ELISA Kit
β2-微球蛋白(β2M)ELISA试剂盒； β2M ELISA Kit
β-1,4-半乳糖转移酶1(β4GALT1)ELISA试剂盒； β4GALT1 ELISA Kit
β-1,4-N-乙酰半乳糖胺基转移酶2(β4GALNT2)ELISA试剂盒； β4GALNT2 ELISA Kit
β-1,3-葡糖醛酸基移酶1(β3GAT1)ELISA试剂盒； β3GAT1 ELISA Kit
α-血红蛋白稳定蛋白(αHSP)ELISA试剂盒； αHSP ELISA Kit
α-乳清蛋白(αLA)ELISA试剂盒； αLA ELISA Kit
α-内啡肽(αEP)ELISA试剂盒； αEP ELISA Kit
α-黑色素细胞刺激素(αMSH)ELISA试剂盒； αMSH ELISA Kit
α-骨胶原交联(αCTx)ELISA试剂盒； αCTx ELISA Kit
α-胞衬蛋白(SPTAN1)ELISA试剂盒； SPTAN1 ELISA Kit
GT39细胞α白蛋白(AFM)ELISA试剂盒； AFM ELISA Kit
α2-纤溶酶抑制因子(α2PI)ELISA试剂盒； α2PI ELISA Kit
α2-微球蛋白样蛋白1(α2ML1)ELISA试剂盒； α2ML1 ELISA Kit
操作流程：
1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线。
