实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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猪瘟病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 |
50次 |
负20度 |
BH-P63531 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
羧化基质Gla蛋白检测试剂盒十九烷 99%硫酸铜，五水 AR，99%Anti-IL-17D/IL-27/FITC 荧光素标记白介素-17D抗体IgG
β1-肾上腺素能受体抗体检测试剂盒十九烷 分析标准品，≥99.7% (GC)硫酸钴，七水 AR，99.5%Anti-IL-27R/TCCR/FITC 荧光素标记白介素27受体抗体IgG
抗M2胆碱能受体抗体检测试剂盒萘酚绿B ≥80% (HPLC)硫酸钴，七水 CP，98.5%Anti-IL-17E/IL-25/FITC 荧光素标记白介素-17E抗体IgG
线粒体肽蛋氨酸亚砜还原酶检测试剂盒萘酚绿B BS氯化钴，六水 ARAnti-IL-17F/IL-24/FITC 荧光素标记白介素-17F抗体IgG
微纤丝关联蛋白4检测试剂盒盐酸萘乙二 AR，98%氯化钴 CPAnti-IL-18R Alpha/FITC 荧光素标记白介素-18受体α链抗体IgG
抗氨酸化蛋白抗体检测试剂盒茚三酮，水合 AR,95.0%氯化钴 ACS reagent, 98% Anti-IL-18R Beta/IL1R7/CD218b/FITC 荧光素标记白介素-18受体β链抗体IgG
1433蛋白检测试剂盒中性红 for cell culture,≥90%（HPLC)氯化钴，六水 植物培养级, ≥98.0% (KT)Anti-IL-19/NG.1/FITC 荧光素标记白介素-19抗体IgG
登革热病抗体检测试剂盒中性红 indicator (pH 6.8-8.0)氯化钴 99.998%
莱克多巴检测试剂盒中性红 ACS硫酸镍,七水AR，98.5 %Anti-IL-20RB/IL-20R2/FITC 荧光素标记白介素20受体β链抗体IgG
腓骨蛋白2检测试剂盒中性红 生物染色级，for the Biological Stain硫酸镍，七水 99.9%
血管内皮生长因子受体检测试剂盒萘 Standard for GC，≥99.5% (GC)硫酸镍，七水 GR，99%Anti-IL-21/FITC 荧光素标记白介素21抗体IgG
Kruppel样因子6检测试剂盒聚己内酰粉 20-40目硫酸镍，七水 SPAnti-IL-21R/FITC 荧光素标记白介素21受体抗体IgG
热休克蛋白65检测试剂盒聚己内酰粉 30-60目硫酸镍，七水 ACSAnti-IL-22/ZCYTO18/FITC 荧光素标记白介素-22抗体IgG
凋亡相关因子检测试剂盒聚己内酰粉 60-90目硫酸镍，七水 99.99%
巨病糖蛋白B检测试剂盒聚己内酰粉 90-180目氨基磺酸镍 CPAnti-IL-22BP/IL22RA2/FITC 荧光素标记白介素22受体结合蛋白抗体IgG
猪瘟病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒小鼠血管生成素3(ANG3)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TrxR1(Thioredoxin Reductase 1) ELISA Kit丝切蛋白抗体
小鼠B活化因子( BAFF/CD257)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TPS(Tryptase) ELISA Kit磷酸化皮层肌动蛋白抗体
小鼠赖氨酰氧化酶(LOX)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human TNPO2(Transportin 2) ELISA Kit磷酸化周期素B1抗体
小鼠单核趋化蛋白1(MCP-1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TPPP(Tubulin Polymerization Promoting Protein) ELISA Kit磷酸化周期素B1抗体
小鼠巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TNX(Tenascin X) ELISA Kit磷酸化cyclin D1抗体
小鼠巨噬炎性蛋白1β(MIP-1β)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human TP/TXA2R(Thromboxane Receptor) ELISA KitCD13氨肽酶N抗体
小鼠调节正常T表达和分泌因子(RANTES)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human TP(Thymidine Phosphorylase) ELISA Kit巨噬炎性蛋白MIP-3a抗体
