实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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胶冻样类芽孢杆菌染料法qPCR试剂盒 |
50次 |
负20度 |
BH-P63625 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
羽状斑驳病检测试剂盒Fmoc-2-氨基苯甲酸 97%麦草畏 分析标准品，92%human Rabies virus IgG/Biotin 人狂犬病免疫球蛋白抗体
轻型黄边病检测试剂盒FMOC-D-α-苯基甘氨酸 98%棉隆 分析标准品，97%Anti-VDCC-L alpha/FITC 荧光素标记L-型电压依赖型钙通道α抗体IgG
烯酰-CoA水合酶检测试剂盒FMOC-苯甘氨酸 ≥98.5%标准溶液 10μg/ml,u=6～4%，酮（剧品）Anti-VDCC-L Beta/FITC 荧光素标记L-型电压依赖型钙通道β抗体IgG
淀粉检测试剂盒FMOC-肌氨酸 98%标准溶液 100μg/ml,u=6～4%，酮（剧品）Anti-VEGF/FITC 荧光素标记VEGF抗体IgG
NAD-苹果酸酶检测试剂盒N-FMOC-L-1,2,3,4-四羟基异喹啉-3-甲酸 97%哌草丹 分析标准品，98%Anti-VEGF(Rabbit)/FITC 荧光素标记血管内皮生长因子抗体IgG
NADP-苹果酸酶检测试剂盒FMOC-N-甲基-L-氨酸 97%噻节因 分析标准品,98.5%Anti-VEGF-A/FITC 荧光素标记血管内皮生长因子A抗体IgG
碳酸酐酶β检测试剂盒Fmoc-N-甲基-L-天冬氨酸 4-叔丁酯 98%甜菜安 分析标准品，97%Anti-VEGF-B/FITC 荧光素标记血管内皮生长因子B抗体IgG
氨酸氨基转移酶检测试剂盒Fmoc-N-甲基-L-谷氨酸 5-叔丁酯 98%野燕枯 分析标准品，98%Anti-VEGF-C/FITC 荧光素标记血管内皮生长因子C型抗体IgG
天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒Fmoc-N-甲基-L-异亮氨酸 98%异菌脲 分析标准品，96%Anti-VEGF-D/FIGF/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠血管内皮生长因子D型VEGFD抗体IgG
L(+)-3-羟脂酰辅酶A脱氢酶检测试剂盒Fmoc-N-甲基-L-亮氨酸 99%异菌脲标准溶液 100μg/ml,u=4%Anti-VEGF/RBITC 罗丹明标记VEGF抗体IgG
NADP-依赖苹果酸脱氢酶检测试剂盒N-Fmoc-N-甲基-O-叔丁基-L-丝氨酸 98%异菌脲标准溶液 10μg/ml,u=6% Mouse Anti-human VEGF/FITC 荧光素标记小鼠抗人VEGF单克隆抗体IgG
脱镁叶绿素A检测试剂盒N-Fmoc-N-甲基-O-叔丁基-L-苏氨酸 98%p, p’-DDE标准溶液100μg/ml,u=3%,溶剂:石油Anti-YAP1/FITC 荧光素标记原癌基因Yes相关蛋白1抗体IgG
7-羟基检测试剂盒Fmoc-N-甲基-L-缬氨酸 98%p, p’-DDE标准溶液10μg/ml,u=3%,溶剂:石油Anti-VEGFR1/VEGF-R1/Flt-1 /FITC 荧光素标记血管内皮生长因子受体1抗体IgG
检测试剂盒Fmoc-N-甲基-D-缬氨酸 98%p, p’-DDT标准溶液100μg/ml,u=3%,溶剂:石油Anti-VEGFR2(VEGF-R2)Flk1/FITC 荧光素标记血管内皮生长因子受体2抗体IgG
苹果酸脱氢酶检测试剂盒Fmoc-L-氨 98%p, p’-DDT标准溶液10μg/ml,u=4%,溶剂:石油Anti-SV2A/FITC 荧光素标记突触泡蛋白2A抗体IgG
胶冻样类芽孢杆菌染料法qPCR试剂盒小鼠层粘蛋白(LN)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TOP1(DNA topoisomerase 1) ELISA Kit22号染色体开放阅读框32抗体
小鼠低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)酶联免疫吸附测定试剂盒Human PTPRF(Receptor-type tyrosine-protein phosphatase F) ELISA KitCD5L抗体
小鼠瘦素受体(LEPR)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human AFM(Afamin) ELISA KitCD6抗体
小鼠钩端螺旋体IgG(Lep IgG)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human DPEP1(Dipeptidase 1) ELISA KitCD9蛋白抗体
小鼠白血病抑制因子受体(LIFR)酶联免疫吸附测定试剂盒Human IFNA8(Interferon alpha-8) ELISA KitCD23/FcεRII抗体
小鼠白三烯C4(LTC4)酶联免疫吸附测定试剂盒Human PRNP(Major prion protein) ELISA KitCD27抗体
小鼠T活化连接蛋白(LAT)酶联免疫吸附测定试剂盒Human S100A10(Protein S100-A10) ELISA KitCD30抗体
