操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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解淀粉芽孢杆菌探针法qPCR试剂盒 |
50次 |
负20度 |
BH-P63629 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
酯酶D检测试剂盒甘肽 ≥97% (HPLC)倍硫磷标准溶液 10μg/ml,u=6%Anti-Il-7R a(CD127)/RBITC 罗丹明标记白介素-7受体a抗体IgG
类黄酮-3',5'-羟化酶检测试剂盒Galanin rat ≥97% (HPLC)甲菊酯 分析标准品，99.5%（剧品）Anti-IL-17/RBITC(Interleukin-17) 罗丹明标记白介素17抗体IgG
类黄酮3'-羟化酶检测试剂盒神经节肽(抗原) ≥97% (HPLC)甲菊酯标准溶液 100μg/ml,u=3%（剧品）Anti-HAS/RBITC 红色罗丹明标记人血清白蛋白抗体IgG
UDP-葡萄糖-3-O-类黄酮糖苷转移酶检测试剂盒胃泌激素释放肽,人 ≥97% (HPLC)甲菊酯标准溶液 10μg/ml,u=6%（剧品）Anti-CD14/RBITC 红色罗丹明标记CD14蛋白抗体IgG
半乳糖苷酶检测试剂盒Gastrin Releasing Peptide porcine ≥97% (HPLC)氟菊酯标准溶液 100μg/ml,u=3%Anti-NHE1/RBITC 红色罗丹明标记钠氢通道蛋白抗体IgG
羧甲基纤维素酶检测试剂盒DL-高丝氨酸 99%氟菊酯标准溶液 10μg/ml,u=4%Anti-RAMP-1/RBITC 红色罗丹明标记受体活性调制蛋白1抗体IgG
β-葡聚糖苷酶检测试剂盒4-(羟基)苯氧基乙酸 98%苯线磷 100μg/ml,u=3%（剧品）Anti-CD86/B7-2/RBITC 红色罗丹明标记CD86蛋白抗体抗体IgG
多聚半乳糖酸裂解酶检测试剂盒D-高丝氨酸 96%苯线磷 10μg/ml,u=4%（剧品）Anti-AT1R/RBITC 红色罗丹明标记血管紧张素Ⅱ-1型受体抗体IgG
抗营养因子检测试剂盒L-高丝氨酸 98%炔氟草 分析标准品，99.4%Anti-AT1R/AGTR1/FITC 荧光素标记血管紧张素Ⅱ-1型受体抗体IgG
木脂素检测试剂盒D-组氨酸 99%啶嘧磺隆 分析标准品，97%Anti-CD93/C1qrp/FITC 荧光素标记CD93抗体IgG
鸟氨酸转氨酶检测试剂盒L-组氨酸甲酯 98%氟啶 分析标准品，99%Anti-CD94/KLRD1/FITC 荧光素标记NK表面抑制性受体CD94抗体IgG
脯氨酸脱氢酶检测试剂盒Fmoc-L-羟脯氨酸 98%氟节 分析标准品，97%Anti-CD97/FITC 荧光素标记CD97抗体IgG
△1-吡咯啉-5-羧酸合成酶检测试剂盒苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 99%解草啶 分析标准品，99.3%Anti-CD99/E2 antigen/FITC 荧光素标记CD99抗体IgG
α-酚转运蛋白检测试剂盒1-羟基-苯并-三氮唑(无水) 99%氯氟吡氧乙酸 分析标准品，97%Anti-XAF1/FITC 荧光素标记XIAP相关因子1凋亡抑制蛋白抗体IgG
氯羟吡啶检测试剂盒3-羟基-1,2,3-苯并三-4(3H)-酮 98%标准溶液 10μg/m,u=6～2%，酮Anti-XBP-1/FITC 荧光素标记核转录因子X盒结合蛋白抗体IgG
解淀粉芽孢杆菌探针法qPCR试剂盒小鼠基质金属蛋白酶1(MMP-1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ECE1(Endothelin-converting enzyme 1) ELISA Kit7号染色体开放阅读框46抗体
小鼠基质金属蛋白酶2(MMP-2)酶联免疫吸附测定试剂盒Human NDNF(Protein NDNF) ELISA Kit蛋白磷酸酶PP2A癌抑制蛋白抗体
小鼠基质金属蛋白酶17(MMP-17)酶联免疫吸附测定试剂盒Human IFNA14(Interferon alpha-14) ELISA Kit巨噬甘露糖受体CD206抗体
小鼠基质金属蛋白酶24(MMP-24)酶联免疫吸附测定试剂盒Human C19orf10(UPF0556 protein C19orf10) ELISA Kit淋巴衍生C-型凝集素抗体
小鼠基质金属蛋白酶7(MMP-7)酶联免疫吸附测定试剂盒Human UBE3A(Ubiquitin-protein ligase E3A) ELISA Kit5号染色体开放阅读框60抗体
小鼠基质金属蛋白酶8(MMP-8)酶联免疫吸附测定试剂盒Human PLA2G2A(Phospholipase A2, membrane associated) ELISA KitCD44V5抗体
小鼠游离脂肪酸(FFA)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TNFRSF10B(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B) ELISA Kit22号染色体开放阅读框23抗体
