实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
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货号
真菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒
50次
负20度
BH-P63660
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
操作流程:
果糖-1,6-二磷酸酶检测试剂盒1-萘酚 AR，99.0%牛蒡子苷 分析标准品，>98% Rabbit Anti-human IgG Whole serum 兔抗人IgG抗血清
甜菜碱脱氢酶检测试剂盒硫代硫酸钠，五水 AR,99% 分析标准品Rabbit Anti-human IgM Whole serum 兔抗人IgM抗血清
5-磷酸核糖激酶检测试剂盒5-氨基-2-氯三氟甲苯 98%积雪草酸 98%Rabbit Anti-human IgA Whole serum 兔抗人IgA抗血清
柠檬酸裂解酶检测试剂盒2-氟苄溴 97% 分析标准品，≥97%Rabbit Anti-human IgGF(ab')2 Whole serum 兔抗人IgGF(ab')2抗血清
谷胱甘肽转移酶检测试剂盒3-氟苄溴 95%土木香内酯 分析标准品，≥97%(HPLC)Rabbit Anti-mouse IgG-Fc Whole serum 兔抗小鼠IgG-Fc抗血清
多检测试剂盒(三氟甲氧基)苯 99%异补骨脂素 分析标准品，>98%Rabbit Anti-human k-chain Whole serum 兔抗人k-链抗血清
葡萄糖脱氢酶检测试剂盒4-(三氟甲氧基)苯甲酸 97%芦荟宁 分析标准品，≥99%Rabbit Anti-human Gamma-chain Whole serum 兔抗人γ-链抗血清
钙调蛋白检测试剂盒甲基烯酰氧基三(三甲基硅氧烷基)硅烷 97%脱水羊藿素 分析标准品,≥99%(HPLC)Rabbit Anti-MK IgG Whole serum 兔抗猴IgG抗血清
谷氨酰合成酶2检测试剂盒过氧化二异苯 CP,98%硫辛酸 98%Rabbit Anti-MK IgM Whole serum 兔抗猴IgM抗血清
内肽酶检测试剂盒过氧化二异苯 99%白果内酯 分析标准品，≥99%Rabbit Anti-mouse IgG Whole serum 兔抗小鼠IgG抗血清
α-L阿拉伯呋喃糖苷酶检测试剂盒三乙 AR,78%甜菜碱,无水 98%Rabbit Anti-mouse IgM Whole serum 兔抗小鼠IgM抗血清
β半乳糖苷酶检测试剂盒三乙 for HPLC,>99.0% (GC)黄芩素 分析标准品，≥98%Rabbit Anti-mouse IgG1 kappa-chain Whole serum 兔抗小鼠k-链抗血清
胰蛋白酶检测试剂盒三乙 ≥99.0% (GC) 黄芩素 98%Rabbit Anti-mouse IgG-Fc Whole serum 兔抗小鼠IgG-Fc抗血清
胰蛋白酶抑制剂检测试剂盒2-乙酰基-5-溴噻吩 99%盐酸小檗碱 98%Anti-Mouse IgA Whole serum 兔抗小鼠IgA抗血清
水解酶检测试剂盒4-乙酰氨基苯硫酚 95%(+)- 分析标准品，≥98% (GC)Rabbit Anti-rat IgG Whole serum 兔抗大鼠IgG抗血清
小鼠AMP活化的蛋白激酶N1(PRKAa1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human B4GALT5(Beta-1,4-galactosyltransferase 5) ELISA Kit7号染色体开放阅读框13抗体
小鼠蛋白磷酸酶(PP)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human CAMKK2(Calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2) ELISA Kit7号染色体开放阅读框29抗体
小鼠蛋白酪氨酸磷酸酶N型受体(PTPRN)酶联免疫吸附测定试剂盒Human CBLB(E3 ubiquitin-protein ligase CBL-B) ELISA Kit8号染色体开放阅读框72抗体
小鼠蛋白酪氨酸磷酸酶O型受体(PTPRO)酶联免疫吸附测定试剂盒Human CD5L(CD5 antigen-like) ELISA Kit7号染色体开放阅读框30抗体
小鼠原钙粘蛋白1(PCDH1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human FAM3B(Protein FAM3B) ELISA Kit7号染色体开放阅读框57抗体
小鼠肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human MYOF(Myoferlin) ELISA Kit7号染色体开放阅读框36抗体
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
真菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒小鼠蛋白激酶N1(PKN1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human FOLR2(Folate receptor beta) ELISA Kit6号染色体开放阅读框72抗体
