实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
产品名称
规格
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货号
*隐球菌检测试剂盒、荧光PCR法
50T
详见说明书
BH-P63799
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
操作流程:
转铁蛋白受体2检测试剂盒乙基叔丁基 97%丰度：10atom％；化学纯度：≥98.5％CNTF 小鼠睫状神经营养因子
转铁蛋白受体1检测试剂盒3,4-苯并芘 96%丰度：99atom％；化学纯度：≥98.5％CTLA-4 小鼠T淋巴相关抗原4
白蛋白片段257-264检测试剂盒2- 98%丰度：10atom％；化学纯度：≥98.5％Cytochrome-C 小鼠色素C
白蛋白片段257-264抗体检测试剂盒仲丁 97%丰度：99atom％；化学纯度：≥98.5％Emap-2 大鼠内皮单核活化多肽2
抗甘露糖受体抗体检测试剂盒2-(2-溴乙基)-1,3-二恶烷 98%丰度：10atom％；化学纯度：≥98.5％ KGF 小鼠角蛋白生长因子
抗CD86抗体检测试剂盒苯并［g,h,i］芘 分析标准品丰度：99atom％；化学纯度：≥98.5％NGF 小鼠神经生长因子
酰化激蛋白检测试剂盒1-溴-2-氟-4-苯 97%丰度：10atom％；化学纯度：≥98％leptin 小鼠瘦素
精氨酸加压素受体2检测试剂盒4-正丁基联苯 97%丰度：99atom％；化学纯度：≥98％ Lymphotactin 小鼠淋巴趋化因子
白介素27检测试剂盒1,3-二均三甲苯基咪唑-2-亚基 97%丰度：10atom％；化学纯度：≥98％mouse Caspase-1 小鼠Caspase-1
甘油检测试剂盒3-丁基吡啶 98%丰度：99atom％；化学纯度：≥98％mouse Caspase-2 小鼠Caspase-2
氨基酸检测试剂盒1,1'-联萘酚-2,2'-双(三氟磺酸酯) 98%丰度：10atom％；化学纯度：≥98％mouse Caspase-3 小鼠Caspase-3
P-糖蛋白检测试剂盒4-氯苯磺酸 98%丰度：99atom％；化学纯度：≥98％mouse Caspase-6 小鼠Caspase-6
硫代酸反应物检测试剂盒环辛烯 95%丰度：10atom％；化学纯度：≥98％mouse Caspase-7 小鼠Caspase-7
线粒体呼吸链检测试剂盒6 激光级丰度：99atom％；化学纯度：≥98％ mouse Caspase-8 小鼠Caspase-8
5脂加氧酶检测试剂盒4-氯甲基-5-甲基-1,3-二氧杂环戊烯-2-酮 98%碳酸钡－13C 丰度：98atom％；化学纯度：≥99％ mouse Caspase-9 小鼠Caspase-9
大鼠脂蛋白a(Lp-a)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ELN(Elastin) ELISA Kit磷脂酸磷酸酶HT抗体
大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)酶联免疫吸附测定试剂盒Human OSCAR (Osteoclast-associated immunoglobulin-like receptor) ELISA KIT穿膜蛋白DLK1抗体（C端）
大鼠凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ODF3L1 (Outer dense fiber protein 3-like protein 1) ELISA KIT二氢叶酸还原酶样1抗体
大鼠L选择素(SELL)酶联免疫吸附测定试剂盒Human OMD(Osteomodulin) ELISA Kit脱氧尿苷三磷酸酶DUT抗体
大鼠黄体生成素释放激素(LHRH)酶联免疫吸附测定试剂盒Human OSBP2 (Oxysterol-binding protein 2) ELISA KIT桥粒芯蛋白3抗体
大鼠淋巴功能相关抗原3(LFA-3/CD58)酶联免疫吸附测定试剂盒Human PNLIPRP1 (Inactive pancreatic lipase-related protein 1) ELISA KIT癌基因删除蛋白2抗体
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
*隐球菌检测试剂盒、荧光PCR法大鼠脂蛋白脂酶(LPL)酶联免疫吸附测定试剂盒Human OXGR1 (2-oxoglutarate receptor 1) ELISA KIT唐氏综合征粘附分子抗体
