实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
产品名称
规格
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货号
流感嗜血杆菌和肺炎链球菌检测试剂盒 、荧光PCR法
50T
详见说明书
BH-P63821
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
操作流程:
血小板膜糖蛋白Ⅱb;Ⅲa检测试剂盒2,4,5-三甲氧基苯甲 98%甲氧基聚乙二马来酰 M.W. 2000human gastric carcinoma Marker ELISA Kit 人胃癌标志物
糖蛋白Ⅴ检测试剂盒细辛 分析标准品，≥98%甲氧基聚乙二马来酰 M.W. 5000HSCCAg-2(uman Squamous Cell Carcinoma Antigen 2) ELISA Kit 人鳞状上皮癌抗原2
补体片段2a检测试剂盒2,4,5-三甲氧基苯甲酸 99%聚氧乙烯二 M.W 4000Human Pancreatic carcinoma markers-CA242 ELISA Kit 人胰腺癌标志物CA242
补体片段2b检测试剂盒5-羟基色氨酸 99%聚氧乙烯二 M.W 1000Human Gastrointestinalcancer Marker-CA199 ELISA Kit 人胃肠癌标志物CA199
补体片段3b检测试剂盒1-乙氧基羰基-4-哌啶酮 98%聚氧乙烯二 M.W 2000Human mammary carcinoma Marker-CA153 ELISA Kit 人癌标志物-CA153
补体片段4a检测试剂盒(R)-(+)-2,2'-双(二苯膦基)-1,1'-联萘 98%三钠 CPHuman ovarian cancer marker-CA125 ELISA Kit 人卵巢癌标志物CA125
补体片段4b检测试剂盒(S)-(-)-2,2'-双(二苯膦基)-1,1'-联萘 98%叔丁基二甲基氯硅烷 97%AFP(Human Alpha-fetoprotein) ELISA Kit 人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白
肌苷检测试剂盒(2S, 4S)-4-二苯基膦-2-(二苯基膦甲基)-1-特丁氧羰基吡咯烷 97%叔丁基二甲基氯硅烷溶液 50%甲苯溶液CEA/CD66(Human carcinoembryonic antign) ELISA Kit 人癌胚抗原
3β羟基类固脱氢酶检测试剂盒氯代二苯基膦 97%1-溴-5-氯戊烷 97%TIMP-4(Human tissue inhibitors of
17β羟基类固脱氢酶检测试剂盒三丁基膦 95%叔丁基二苯基氯硅烷 98%TIMP-3(Human tissue inhibitors of
生长因子检测试剂盒2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮 98%氯代叔丁烷 99%TIMP-2(Human tissue inhibitors of
半胱氨酸检测试剂盒4-氯-3-甲酸 99%氯代叔丁烷 Standard for GC,≥99.5% (GC)OSM(Human Oncostatin-M) ELISA KIT 人抑瘤素M
去泛素化酶检测试剂盒5-氯-2-甲酸 98%3,4-二氢-2H-吡喃 98%SP-D(Human Pulmonary surfatcant-associated protein D) ELISA Kit 人肺表面活性物质相关蛋白D
血管生长素检测试剂盒1-乙氧基羰基-4-哌啶酮 98%戊二酸酐 98%SP-C(Human Pulmonary surfatcant-associated protein C) ELISA Kit 人肺表面活性物质相关蛋白C
免疫球蛋白检测试剂盒乙硫异酰 98%三乙基硅烷 99%SP-B(Human Pulmonary surfatcant-associated protein B) ELISA Kit 人肺表面活性物质相关蛋白B
大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)酶联免疫吸附测定试剂盒Human MAD1L1(Mitotic arrest deficient 1-like protein 1) ELISA Kit腺样癌特异性相关抗原EMC1抗体
大鼠血小板/内皮粘附分子(PECAM1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) ELISA KIT硫酸软骨素蛋白多糖3抗体
大鼠血小板白C激酶底物同源性样域家族A成员2(PHLDA2)酶联免疫吸附测定试剂盒Human HBXIP(Hepatitis B virus X-interacting protein) ELISA Kit染色体区域稳定蛋白/核输出蛋白1抗体
大鼠多效生长因子(PTN)酶联免疫吸附测定试剂盒Human MST1R(Macrophage-stimulating protein receptor) ELISA Kit磷酸化转录因子ELK1抗体
大鼠足标志蛋白(PCX)酶联免疫吸附测定试剂盒Human LOR (Loricrin) ELISA KITETS相关蛋白71抗体
大鼠脊髓灰质炎病受体相关蛋白1(PVRL1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human LRTM1 (Leucine-rich repeat and transmembrane domain-containing protein 1) ELISA KIT外胚层发育不良蛋白1抗体
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
流感嗜血杆菌和肺炎链球菌检测试剂盒 、荧光PCR法大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SEMG1(Semenogelin-1) ELISA Kit腺样癌特异性相关抗原EMC1抗体
