操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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炭疽杆菌检测试剂盒、荧光PCR法 |
50T |
详见说明书 |
BH-P64005 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
Bcl-2相关死亡促进因子检测试剂盒甲酸钠 for HPLC, ≥99.0% (NT)镁标准溶液 1000μg/mlAnti-ADRB3/ Beta3-AR /FITC 荧光素标记肾上腺素能受体β3抗体IgG
磷酸化Bcl-2相关死亡促进因子检测试剂盒甲酸钠 99.998%
葡萄糖检测试剂盒二乙基二硫代氨酸钠(铜试剂) AR,99.0%汞标准溶液 100ml/L，溶剂：3%硝酸Anti-AD7C/FITC 荧光素标记神经丝蛋白抗体IgG
维生素B3检测试剂盒二乙基二硫代氨酸钠(铜试剂) ACS，≥99.0%，用于测定和分离汞标准溶液100μg/ml,基体:3%硝酸Anti-AD7C-NTP/NTP/AF /FITC 荧光素标记神经丝蛋白抗体（人）IgG
犬尿酸检测试剂盒硅酸 AR汞标准溶液10.0ng/g，基体: 0.4mol/L HCL，K+2.2mg/L，Na+23mg/LAnti-AE3/FITC 荧光素标记阴离子交换蛋白3抗体IgG
喹啉酸磷酸核糖基转移酶检测试剂盒升华硫 AR,99.5%钼标准溶液 1000μg/mlAnti-AEV/FITC 荧光素标记禽脑脊髓炎病抗体IgG
维生素B5检测试剂盒升华硫 CP,99.0%钼标准溶液 500 mg/L,溶剂:微量硫酸Anti-AEBP1/FITC 荧光素标记脂肪增强结合蛋白1抗体IgG
BCA蛋白检测试剂盒升华硫 99.99%
唾液酸检测试剂盒无水磷酸二氢钠 用于分子生物学, ≥99%铌标准溶液 1000μg/mlAnti-phospho-Afadin(Ser1718) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化丝状肌动蛋白结合蛋白抗体IgG
钙调磷酸酶检测试剂盒无水磷酸二氢钠 用于与昆虫培养，≥99.0% (T) 镍标准溶液 1000μg/mlAnti-AGER/RAGE /FITC 荧光素标记晚期糖基化终末产物特异性受体抗体IgG
Slingshot同源物检测试剂盒无水磷酸二氢钠 for HPLC, ≥99.0% (T)镍标准溶液 500mg/L，溶剂：1%硝酸Anti-AGEs/FITC 荧光素标记晚期糖基化终末产物抗体IgG
钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶检测试剂盒十二烷基硫酸钠 ACS镍标准溶液 100(20℃)μg/mL，基体:1%HNO3Anti-AGER/RAGE/Cy3 荧光素Cy3标记晚期糖基化终末产物特异性受体抗体IgG
钙调蛋白依赖性蛋白激酶1D检测试剂盒酸钠 99%镍标准溶液 100μg/mlAnti-Aggrecan/FITC 荧光素标记软骨蛋白聚糖/可聚蛋白多糖抗体IgG
钙调素依赖蛋白激酶II检测试剂盒钠 AR,99%亚硝酸盐标准溶液 1000μg/mlAnti-Aggrecan2/ADAMTS-5/FITC 荧光素标记软骨蛋白聚糖抗体IgG
单丝氨酸蛋白激酶1检测试剂盒钠 99.999%
炭疽杆菌检测试剂盒、荧光PCR法猪信号传导转录激活因子3(STAT3)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SRSF2(Serine/arginine-rich splicing factor 2) ELISA Kit糖磷脂酰肌抗体
猪Bκ 轻肽基因增强子核因子抑制因子ε(Nfkbie)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human TRBV5-4 ELISA Kit乙二酶1抗体
猪尿素酶相关蛋白C(UreC)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human DCT(L-dopachrome tautomerase) ELISA Kit核呼吸因子2抗体
猪N端中段骨钙素(N-MID-OT)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TREML4 ELISA Kit肿瘤转移抑制基因GDIA1抗体
猪生长分化因子15(GDF15)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TRAP1 ELISA Kit肿瘤转移抑制基因GDIA2抗体
猪血清/糖皮质激素调节激酶2(SGK2)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TRAPA/SSR1 ELISA Kit胰高血糖素抗体
猪糖链抗原19-9(CA19-9)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human TRAT1 ELISA Kit线粒体甘油3磷酸酰基转移酶抗体
