操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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对虾黄头病病毒、YHV检测试剂盒、荧光PCR法 |
50T |
详见说明书 |
BH-P64057 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
钙调素依赖蛋白激酶II检测试剂盒十一烷 98%呋喃唑酮 分析标准品Anti-DAT1/FITC 荧光素标记抗多巴相关转录因子1抗体IgG
磷酸肌3激酶检测试剂盒十一烷 99%呋喃唑酮 98%Anti-DBH /FITC 荧光素标记多巴β羟化酶抗体IgG
O-6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶检测试剂盒二乙烯苯 80%呋喃西林 分析标准品Anti-DCC/FITC 荧光素标记兔抗结直肠癌缺失基因抗体IgG
脑多巴神经营养因子检测试剂盒二乙烯苯 50%呋喃西林 98%Anti-DC-LAMP/LAMP-3/CD208/FITC 荧光素标记CD208抗体IgG
Notch受体检测试剂盒二乙烯苯 55%硫酸铝，十八水 Ph. Eur., BP, 100-110%, 51.0-59.0% Al2(SO4)3 Anti-DC-SIGN/CD209/CLEC4L/FITC 荧光素标记CD209抗体IgG
Notch配体检测试剂盒纳米二氧化锡 99.9%
α-乳白蛋白；α乳清蛋白检测试剂盒AMBERLITE IRA402 CL阴离子交换树脂 氯型赫斯特荧光燃料，33258 98%Anti-DCIR/CLEC4A/FITC 荧光素标记C型凝集素结构域家族4成员A抗体IgG
ATP合成酶检测试剂盒橡胶PTFE垫片,配套120ZSS棕色瓶,φ20mm*1.4mm赫斯特荧光燃料，33342 98%Anti-DCN/FITC 荧光素标记抗核心蛋白聚糖抗体IgG
内源性素检测试剂盒中空纯四氟塞,配套120ZSS玻璃瓶,φ18*18胞内钙荧光探针BAPTA, AM 95%Anti-DCP/FITC 荧光素标记异常凝血酶原/脱-γ-羧基凝血酶原抗体IgG
氨基酸检测试剂盒橡胶覆PTFE垫片,匹配30Zss黑色低盖,φ18*1.52',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素 90%Anti-DCP /HRP 辣根过氧化物酶标记异常凝血酶原/脱-γ-羧基凝血酶原抗体IgG
法尼基二磷酸合酶检测试剂盒橡胶覆PTFE垫片,匹配500MLZPA棕色瓶低盖,φ25.5*1.52',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素乙酰甲酯1 mg/ml,溶剂:DMSOAnti-DCX/FITC 荧光素标记双皮质素抗体IgG
白介素受体相关激酶3检测试剂盒500ZPA四氟柱塞,匹配500MLZPA棕色瓶,Ф23*27.7 ,2',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素乙酰甲酯Mixed isomersAnti-Phospho-Doublecortin (Ser297) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠等磷酸化双皮质素抗体IgG
白介素受体相关激酶3检测试剂盒30ZSS中空四氟塞,φ16*17.36-羧基荧光素 95%Anti-D-DIMER/FITC 荧光素标记交联纤维蛋白二聚体抗体IgG
吲哚酸检测试剂盒PTFE垫片,匹配2ml棕色螺纹玻璃瓶和瓶盖,φ9*1.55-羧基荧光素 95%Anti-DDAH-II /FITC 荧光素标记双甲基精氨酸水解酶2抗体IgG
前列腺酸性磷酸酶检测试剂盒PTFE垫片,匹配3ml棕色螺纹玻璃瓶和瓶盖,φ11.8*1.55-羧基四甲基罗丹明 95%Anti-DDB1/FITC 荧光素标记损伤DNA结合蛋白1抗体IgG
对虾黄头病病毒、YHV检测试剂盒、荧光PCR法猪转化生长因子β3(TGF-β3)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human Synaptotagmin-11 ELISA Kit人血清抗体
猪核因子-κB亚基p65(NF-κB p65)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SYTL2 ELISA Kit血红素氧合酶 1/热休克蛋白32抗体
猪闭锁蛋白/遮光蛋白(OCLN)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TACC1 ELISA Kit磷酸化HER3受体抗体
猪表面膜免疫球蛋白A(mIgA)酶联免疫吸附测定试剂盒Human C4B(Complement C4-B) ELISA Kit磷酸化组蛋白去乙酰化酶4/5/7抗体
猪色素C(Cyt-C)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TACC3 ELISA Kit异染色质蛋白1-γ抗体
猪载脂蛋白E(ApoE)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human TACC2 ELISA Kit组蛋白H1抗体
猪β2微球蛋白(BMG/β2-MG)酶联免疫吸附测定试剂盒Human Syntaxin 3 ELISA Kit组蛋白去乙酰化酶1抗体
