操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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尼帕病毒检测试剂盒、荧光PCR法 |
50T |
详见说明书 |
BH-P64077 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
色氨酸羟化酶检测试剂盒氯酚红 96%1-Boc-3-吡咯烷酮 97%Anti-GABA-B-R1/FITC 荧光素标记抗g-氨基丁酸B1受体抗体IgG
环氧二十碳三烯酸检测试剂盒四溴酚蓝 高纯级,≥95.0% (HPLC)1-Boc-4-(氨基)哌啶 97%Anti-GABA /FITC 荧光素标记兔抗γ1氨基丁酸抗体IgG
二羟二十碳三烯酸检测试剂盒四溴酚蓝 IND3-氨甲基-1-Boc-哌啶 97%Anti-GABAB2/FITC 荧光素标记抗g-氨基丁酸B2受体抗体IgG
卵泡激素受体检测试剂盒ICP排液管7-氯吲哚 98%Anti-phospho-GAB2(Ser623) /FITC 荧光素标记磷酸化接头蛋白Gab2抗体体IgG
钥孔虫戚血蓝蛋白IgG抗体检测试剂盒ICP进样管5-氟-2,4-二氯嘧啶 98%Anti-phospho-GAB2 (Tyr452) /FITC 荧光素标记磷酸化接头蛋白Gab 2抗体IgG
钥孔虫戚血蓝蛋白IgM抗体检测试剂盒1-金刚烷甲 99%7-乙基吲哚 98%Anti-phospho-GAB2 (Tyr643) /FITC 荧光素标记磷酸化接头蛋白Gab2抗体IgG
蛋白激酶R样内质网激酶检测试剂盒反式-1,2-环己二 ≥95.0% (GC)7-氟吲哚 98%Anti-phospho-GAB2 (Ser623) /FITC 荧光素标记磷酸化接头蛋白Gab 2抗体IgG
金属转运蛋白1检测试剂盒反式-1,2-环己二 98%2,5-呋喃二羧酸 98%Anti-GAD-65/FITC 荧光素标记谷氨酸脱羧酶-65抗体IgG
蛋氨酸脑啡肽检测试剂盒环己 AR,98%1,1,7,7-四甲基－8-羟基-9-基-久洛尼定 99%Anti-GAD-65(CT)/FITC 荧光素标记谷氨酸脱羧酶-65抗体(C端多肽)IgG
内质网核信号转导蛋白a1检测试剂盒环己烯 ≥99.0% (GC)2-羟基-5-硝基烟酸 98%Anti-GAD-67 /FITC 荧光素标记谷氨酸脱羧酶-67抗体IgG
微粒体甘油三酸酯转运蛋白检测试剂盒环氧环己烷 98%2-甲氧基异烟酸 98%Anti-GADD34/FITC 荧光素标记生长抑制DNA损伤基因34抗体IgG
组H1受体检测试剂盒二氧化双环戊二烯(内型和外型异构体混合物） 97%3(2H)-哒酮 98%Anti-GADD45/FITC 荧光素标记生长抑制DNA损伤基因45抗体IgG
速激肽1检测试剂盒正戊 GCS, ≥99.5% (GC) R-1-苄氧羰基－羟基吡咯 95%Anti-GADD153/FITC 荧光素标记生长抑制DNA损伤基因153抗体IgG
成骨相关转录因子抗体检测试剂盒正戊 高纯级，>99.5%(GC)四氟酸银 99%Anti-Galanin/FITC 荧光素标记神经节肽抗体“甘肽”IgG
天冬酰內肽酶检测试剂盒正戊 GR,99%1-Cbz-4-哌啶酮 98%Anti-Galectin /FITC 荧光素标记半乳糖凝集素抗体IgG
尼帕病毒检测试剂盒、荧光PCR法猪Persephin蛋白(PSPN)酶联免疫吸附测定试剂盒Human FZD3(Frizzled-3) ELISA Kit磷酸化组蛋白去乙酰化酶4抗体
猪胃蛋白酶原C(PGC)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SSTR5 ELISA Kit磷酸化组蛋白去乙酰化酶7抗体
猪趋化因子C-C-基元配体14(CCL14)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human ST6GALNAC5 ELISA KitHIRA相互作用蛋白3抗体
猪精氨酰tRNA合成酶(RARS)酶联免疫吸附测定试剂盒Human STARD10 ELISA KitHOOK1蛋白抗体
猪凋亡蛋白酶激活因子1(APAF-1)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human ST7L ELISA Kit人类免疫缺陷病2型/2型艾滋病病gp41+gp160抗体
猪成熟促进因子(MPF)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human ST6GALNAC1 ELISA Kit人类免疫缺陷病2型/2型艾滋病病gp41+gp160抗体
猪血管内皮抑素抗体(ES-Ab)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human ST7 ELISA KitHCG3蛋白抗体
