操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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马种特异性基因检测试剂盒、荧光PCR法 |
50T |
详见说明书 |
BH-P64096 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
再生胰岛衍生蛋白3γ检测试剂盒异丁香酚(正+反) 97%罗丹明6G 高纯级，95%Anti-HSP-60/FITC 荧光素标记热休克蛋白-60蛋白抗体IgG
抑制剂K结合检测试剂盒（-）-薄荷 Standard for GC ,≥99.5% (GC)10-十一烯酸 95%Anti-HSP-70/FITC 荧光素标记HSP-70蛋白抗体IgG
酰基辅酶A合成酶检测试剂盒（-）-薄荷 99.5%溴化锂 99.9%
组蛋白去乙酰化酶3检测试剂盒（-）-薄荷 99%苯 standard for GC, ≥99.9% (GC)Anti-OMPC/OMPA/FITC 荧光素标记抗大肠杆菌外膜孔道蛋白C抗体IgG
磷酸化胰岛素受体检测试剂盒（-）-薄荷 分析标准品，≥99.5%苯 for HPLC, ≥99.7%Anti-HSP-90 Alpha/FITC 荧光素标记HSP-90α蛋白抗体IgG
组蛋白去乙酰化酶检测试剂盒氨磺酸 98%氯苯 for HPLC, ≥99.5%Anti-HSP-90 Alpha/FITC 荧光素标记热休克蛋白90α抗体IgG
5-羟色受体检测试剂盒L-氨酰-L-谷酰 98%10X分子筛 干燥剂用Anti-HSP-90 Beta/FITC 荧光素标记HSP-90β蛋白抗体IgG
腺苷酸环化酶检测试剂盒4-联苯酸 98%蒽 98%Anti-HSP27/RBITC 红色荧光素罗丹明标记热休克蛋白-27抗体IgG
腺苷酸环化酶1检测试剂盒3-溴邻二甲苯 98%氧化钕 99%Anti-HSP-105/FITC 荧光素标记热休克蛋白HSP105抗体IgG
心肌营养素1检测试剂盒2-甲酸吡啶铬(III) 98%碳化钨 粉末，99.9%
幽门螺杆菌快速尿素酶检测试剂盒2,3-环戊烯并吡啶 98%天青Ⅱ ARAnti-HtrA2/Omi/FITC 荧光素标记丝氨酸蛋白酶/线粒体丝氨酸蛋白酶抗体IgG
血管紧张素转化酶2检测试剂盒D-环丝氨酸 98%火棉胶 AR,4-8% in ethanol/diethyl ether Anti-TRT/FITC 荧光素标记端粒酶抗体IgG
血管紧张素转化酶1检测试剂盒3,4-二甲氧基肉桂酸 99%结晶紫 ACS, ≥90.0%Anti-TRT/TERT/PE 荧光素PE标记端粒酶抗体IgG
肝生长因子激活物检测试剂盒5,6-二甲氧基-1-茚酮 98%达旦黄 CPAnti-COX10/FITC 荧光素标记COX10抗体IgG
乙酰辅酶A羧化酶1检测试剂盒3-(3,4-二甲氧基苯)酸 98%氟化钬(III) 无水,粉末, 99.99%
马种特异性基因检测试剂盒、荧光PCR法猪低密度脂蛋白受体(LDLR)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SNAPIN ELISA Kit组蛋白H1FOO抗体
猪突触素(SYP)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SMPX ELISA Kit同源盒蛋白B6抗体
猪T生长因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human SNCAIP ELISA Kit错构素蛋白抗体
猪白三烯E4(LTE4)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human SMYD4 ELISA Kit磷酸化组蛋白H1FOO抗体
猪碳酸酐酶IX (CA9)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SNRPA1 ELISA Kit单纯疱疹病1型转录调节因子ICP22抗体
猪B分化因子(BCDF)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human SNAI1(Snail family tran
猪内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制因子(VASPIN)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SNAI3 ELISA KitH2B组蛋白家族M蛋白抗体
