实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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出血性大肠杆菌O157:H7、EHEC O157检测试剂盒、荧光-PCR法 |
50T |
详见说明书 |
BH-P64377 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
颗粒酶A检测试剂盒甲基异丁酮 >99.5%(GC)安息香 99.5%
穿孔素;成孔蛋白检测试剂盒壬基酚 GR联苯甲酰 99.0%
壳三糖酶检测试剂盒壬基酚(混合物) SU安息香二甲 99%
登革热病检测试剂盒壬基酚 分析标准品1-羟环己基苯酮 98%
乙型肝炎病检测试剂盒对壬基酚 85%2-羟基-2-酮 97%
丝氨酸蛋白酶抑制剂B1检测试剂盒对壬基酚 98%乙(95%) AR,95.0%
血管生成素样蛋白8检测试剂盒对壬基酚 分析标准品，异构体混合物乙(95%) CP,95.0%
γ干扰素诱导单核因子检测试剂盒异辛烷 Standard for GC, ≥99.5% (GC)漆黄素 98%
γ干扰素诱导蛋白16检测试剂盒异丁酸 standard for GC, ≥99.5% (GC)5-羟基色氨酸 99%
γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶检测试剂盒一异 分析标准品盐酸育亨宾 99%
γ-谷氨酰转肽酶检测试剂盒四氧化三铁 99.99%
γ谷氨酰转移酶检测试剂盒茚 分析标准品，用于环境分析，>99.0%(GC)过氧化二叔丁基 97%
δ氨基乙酰酸脱水酶检测试剂盒高氯酸铁 CP 苯甲酰氯 AR,99.0%
阿尔茨海默病相关神经丝蛋白检测试剂盒2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐 98%过氧化苯甲酰 75%, remainder water
磷酸羟基酮酸检测试剂盒2-氯吩噻 99%醋酸镧 99.99%
3-磷酸甘油酸酯检测试剂盒邻氯苯乙酮 98%(+)二异松蒎基氯烷 60% in Heptane, ca. 1.7mol/L
屋尘螨变应原Derp1 IgE抗体检测试剂盒肉桂酰氯 97%(-)二异松蒎基氯烷 60% in Heptane, ca. 1.7mol/L
β-内酰酶检测试剂盒3,5-二氯苯 99%三仲丁基氢化锂 1M THF溶液
*抑癌基因X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1检测试剂盒3,5-二甲氧基苯 98%四正丁基四氢酸铵 95%
乳酸脱氢酶检测试剂盒3,5-二苄氧基苯甲 98%三甲基环三氧烷 1M THF solution
KL-7检测试剂盒6,7-二羟基 98%叔丁基异硫酸酯 99%
出血性大肠杆菌O157:H7、EHEC O157检测试剂盒、荧光-PCR法猴载脂蛋白C2(ApoC2)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human S100A16(Protein S100-A16) ELISA KitNDUFAF4抗体
猴甲状旁腺激素受体2(PTHR2)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ELANE(Neutrophil elastase) ELISA Kit分化相关基因NDRG1抗体
猴磷酸甘油酸变位酶2(PGAM2)酶联免疫吸附测定试剂盒Human RRM1(Ribonucleoside-diphosphate reductase large subunit) ELISA Kit神经降压素抗体
猴表面膜免疫球蛋白A(mIgA)酶联免疫吸附测定试剂盒Human PSG3(Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 3) ELISA Kit核受体辅助抑制因子2抗体
猴巨噬集落激因子(MCSF)酶联免疫吸附测定试剂盒Human IL5RA(Interleukin-5 receptor) ELISA Kit核仁磷酸蛋白抗体
猴血小板相关免疫球蛋白(PAIg)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human NUCB2(Nucleobindin-2) ELISA Kit嗜中性粒胞浆因子4抗体
猴多功能蛋白聚糖(VS)酶联免疫吸附测定试剂盒Human S100A16(Protein S100-A16) ELISA Kit磷酸化核因子NF-κB p65抗体
