实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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胎儿弯曲菌、CF检测试剂盒、荧光-PCR法 |
50T |
详见说明书 |
BH-P64402 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
线粒体核糖体蛋白L41检测试剂盒单组份卡尔费休试剂（测酮类样 2mg水/ml，测水量较小样品二糠基二硫 95%
金属硫蛋白2检测试剂盒单组份卡尔费休试剂（测酮类样 1mg水/ml，测水量微小样品二糠基硫 98%
CD5分子样蛋白检测试剂盒单组份含吡啶卡尔费休滴定剂 5mg水/ml，测水量较高样品二基硫 98%
血小板型磷酸果糖激酶检测试剂盒单组份含吡啶卡尔费休滴定剂 2mg水/ml，测含水量较低样品基二硫 99%
葡萄糖调节蛋白-94检测试剂盒单组份含吡啶卡尔费休滴定剂 1mg水/ml，测含水量微小样品4,5-二甲基-2-异丁基噻唑啉 97%
S100钙结合蛋白PBP检测试剂盒单组份滴定用溶剂(不含甲) 水分≤0.01%，用作反应介质2,5-二甲基-3-(2H)呋喃酮 98%
14-3-3蛋白检测试剂盒单组份油类测定用溶剂 水分≤0.01%，测矿物油2,5-二甲基-3-呋喃硫 1135921
大内皮素检测试剂盒扑草净 分析标准品，99.5%二正辛 97%
单氧化酶检测试剂盒聚乙二二烯酸酯 平均分子量 ~258 1-己烯 99%
单纯疱疹病抗原2检测试剂盒聚乙二二烯酸酯 平均分子量~5751-己烯 分析标准品，≥99.5% (GC)
单核趋化蛋白1检测试剂盒聚乙二二烯酸酯 平均分子量 ~700 1-己烯 97%
单核趋化蛋白3检测试剂盒聚乙二甲基烯酸酯 平均分子量 ~3001-己烯 Standard for GC
单核趋化蛋白5检测试剂盒聚乙二甲基烯酸酯 平均分子量 ~475α-乙烯 99%
单抗MG7相关抗原检测试剂盒聚乙二甲基烯酸酯 平均分子量~9501-辛烯 98%
磷脂酰肌特异性磷酯酶Cγ2检测试剂盒2-(3,5-二溴-2-吡啶偶氮)-5-二乙氨基酚 AR气相纳米二氧化硅 99.8%,比表面积（BET）：100m2/g；粒径：7-40n
环氧化酶2检测试剂盒二乙氨基乙基纤维素-1 TLC二氧化硅 99.5%,30±5nm
3-羟基丁酸脱氢酶1检测试剂盒二甲基黄 分析标准品，≥98.0% (HPLC)二氧化硅 99.5%,15±5nm
GTP结合蛋白3检测试剂盒二十烷 standard for GC,>99%(GC)气相纳米二氧化硅 99.8%,比表面积（BET）：380m2/g;粒径：7-40nm
αβ水解酶结构域蛋白11检测试剂盒二十烷 AR疏水性气相纳米二氧化硅 99.8%,比表面积（BET）：115m2/g；粒径
EB病早期抗原IgG抗体检测试剂盒二十烷 99%气相纳米二氧化硅 99.8%,比表面积（BET）：150m2/g；粒径：7-40n
清道夫受体B成员1检测试剂盒二十烷 分析标准品，≥99.5% (GC)二氧化硅 99.9%
胎儿弯曲菌、CF检测试剂盒、荧光-PCR法猴脑素受体(CNR1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human LIF(Leukemia inhibitory factor) ELISA Kit非霍奇金淋巴瘤重复蛋白3抗体
猴白分化抗原CD4(CD4)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human PDGFA(Plaet-derived growth factor subunit A) ELISA Kit增殖相关核仁抗原抗体
猴桩蛋白(Pax)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ABCG1(ATP Binding Cassette Transporter G1) ELISA KitNALP12抗体
猴血栓前体蛋白(TpP)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ACA-IgG(Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit富含亮氨酸重复结构域蛋白6抗体
猴封闭蛋白1(CLDN1)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human ACC(Acetyl-CoA Carboxylase) ELISA Kit富含亮氨酸重复结构域蛋白7抗体
猴磷脂爬行酶1(PLSCR1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human B2M(Beta2-microglobulin) ELISA Kit富含亮氨酸重复结构域蛋白9抗体
猴激肽原1(KNG1)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human MUC-1(Mucin-1) ELISA Kit富含亮氨酸重复结构域蛋白10抗体
