备好相应的实验器材：装有75%医用消毒酒精的酒精喷壶、PBS缓冲液、胰酶、含血清培养基、巴氏吸管、移液器、离心管、废液缸。至于其他的净台、培养箱、离心机等都是一个细胞间的基础设施，这里就不一一列出。 然后，我们需要把我们准备的器材放入净台，打开紫外照射灭菌，值得注意的是若是培养的细胞对温度比较敏感，可以将含血清的培养基瓶子（包括盛放胰酶的瓶子）放入37℃的水浴箱使得培养基温度在37℃，再转移到净台紫外灭菌，当然一般的细胞对培养基的温度不是很敏感，不用对培养基加温也是可以的。另外，细胞培养间也需要紫外照射半小时左右。
1、 吸出原培养液；
2、 加入2ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃；
3、 加入1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞，放入培养箱消化；
4、 消化时间跟据细胞特性有所不同，显微镜下看到细胞块中间的细胞明显分离变圆，侧立培养瓶细胞可以滑落时可终止消化，全程不要拍打培养瓶；
5、 加入3ml含血清的培养基终止消化，吹打细胞使之脱落并在液体里反复吹打使细胞，使之尽量呈单颗细胞的悬浮液，这时可以在显微镜看下；
6、 收集细胞悬液离心，1200rpm（约250g） 3分钟，离心完吸出上清丢弃。
7、 加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞即可，按需接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。
8、 检查培养箱二氧化碳，温度和水盘。
