详述ELISA​实验注意事项

酶联免疫吸附测定（enzyme ed immunosorbent assay，简写ELISA）是蛋白定量的金标准，也是免疫学研究中*常用的实验方法。ELISA指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法，分为三种方法，夹心法、竞争法、间接法，*常用的就是夹心法。

详述ELISA实验注意事项：

1、每一个不同的试剂盒都要重新检测标准品，做标曲，否则会有较大误差。

2、每次洗涤的步骤都要洗干净，如果是手动洗涤，每次拍板用的滤纸都要更换，防止交叉污染。

3、加样量要完全*，使用洗液枪枪头不能有多余液滴残留，会导致加样量偏多。

4、孵育样品、检测抗体和显色底物均需要覆盖封板膜，减少污染和挥发，且每次使用后都要更换新的封板膜，防止交叉污染。

5、血清样本取样时要注意，避免溶血、脂血等样本。如样本条件受限，建议用样本稀释液适当稀释，减少基质效应影响。

6、实验之前将微孔板和试剂在室温下平衡；不要将微孔板置于温度变化太大的地方（如阳光直射、通风处等）；可用铝箔包住微孔板底部及下部外沿降低边缘效应和漂移；不使用边缘的孔。综上所述以尽量减少边缘效应。

7、ELISA数据处理有专门的软件，并且要核对说明书选择合适的拟合曲线。

ELISA是一种广泛应用于大分子蛋白和小分子激素定量检测的免疫诊断技术。合适的样本预处理、的仪器＆试剂、正确的实验操作，是保证ELISA实验结果准确可靠的必要条件。