D-异柠檬酸检测试剂盒 型号ZS21-ZME-K-ISOC库号D245876

库号：D245876

名称：D-异柠檬酸检测试剂盒
产品货号：K-ISOC
规格：100
产地：爱尔兰
数量：大量
英文名：D-Isocitnc Acid Assay Kit
保存条件：4-6摄氏度
保质期：1年以上
外观 四玻璃瓶。
比重 不适用
在水中的溶解度 易溶
pH值 7.0
气味 无
粉末和液体形式
稳定性 稳定 (冷冻)5年或以上
成分:
名称 比例
三/ HCl缓冲液 1瓶（玻璃）
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 1小瓶（玻璃）
异柠檬酸脱氢酶 1瓶（玻璃）
Ḏ-异柠檬酸标准解决方案，1瓶（玻璃）
操作说明书
编号：K-ISOC 10/04
规格：100次测定（保质期2年，液体装，不存在稀释后改变保质期的缺点）
简介:
D-异柠檬酸存在于所有动植物体内,通常含量很低,它是柠檬酸循环的一部分.在检测果汁(尤其是桔汁)中是否含有非法添加剂(掺假)方面,D-异柠檬酸的检测非常重要.不仅要检测含量,还要检测柠檬酸/D-异柠檬酸比例,若此比例太高则意味着添加了柠檬酸.
原理:
在异柠檬酸脱氢酶(ICDH)作用下,D-异柠檬酸被尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)氧化生成2–酮戊二酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)以及CO2.
(1) D-异柠檬酸 + NADP+ (ICDH) 2-oxoglutarate + CO2 + NADPH + H+
生成的NADPH的量取决于D-异柠檬酸的量,NADPH的吸光度值可在340下测量.
限制性的D-异柠檬酸可以通过加碱水解后(2), (3),再利用同样的原理进行测定(1).
(2) D-Isocitric acid ester + H2O (pH 9-10) D-异柠檬酸 +乙醇
(3) D-异柠檬酸内酯 + H2O (pH 9-10) D-异柠檬酸
特异性, 灵敏度, 测量范围和度:
该实验方法是专门用于测定D-异柠檬酸含量的。
小可调吸光光度为0.005个吸光单位,样品体积为2.00mL(或对于浓度为3.54mg/L样品体积为0.10mL),若在 340nm下检测,此时的D-异柠檬酸浓度为0.177mg/L.如果小可调吸光光度为0.01吸光光度,样品体积为2.00mL,在340nm下检测,此时的D-异柠檬酸检测线为0.354mg/L.
该实验的测量范围为1-80ug D-异柠檬酸,同一样品分别进行两次测定,其吸光度值会有0.005-0.010吸光单位的变化,对于样品体积为2.00mL,此时的D-异柠檬酸浓度大约在0.177-0.354mg/L之间,如果样品是经过稀释的,在计算结果时候需要乘以相应的稀释系数(F),如果在样品制备阶段,样品的重量是被称量 的,如:10g/L,0.02-0.05g/100g的细微差别能够被分辨.
干扰:
如果D-异柠檬酸在试验规定的时间内(大约3分钟)完成转化过程,通常认为没有干扰发生,然而,通过向已完成反应的试管中添加D-异柠檬酸(0.1mL中添加30ug),进一步的验证实验,吸光度值还将进一步增加.
利用附带的内部的标准质控可以对干扰物质进行鉴定.定量回收试验:通过向样品中添加标准质控,计算样品在处理和提取时的损失.如:在初的提取步骤时添加一定量的D-异柠檬酸.
性:
D-异柠檬酸测定所使用的试剂没有有毒物质.然而浓缩缓冲液中含有作为防腐剂用的(0.02 % w/v),需要按照实验室操作规程进行试验.
试剂盒:
D-异柠檬酸含量测定试剂盒可以进行100次的测定试验,并提供有全部的试验方法:
瓶1: Tris/HCl 缓冲液 (12mL, 2 M, pH7.6) +氯化镁(100mM)+(0.02 % w/v)
稳定性> 2年,4°C保存.
瓶2: NADP+(165 mg)
稳定性> 5年,-20°C保存.
瓶3: 异柠檬酸脱氢酶(1.8 U/mL),悬浮液2.1 mL.
稳定性> 2年,4°C保存.
瓶4: D-异柠檬酸质控标准液(5 mL, 0.3mg/mL) +(0.02 % w/v)
稳定性> 2年,-20°C保存.