培养步骤:
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:产品仅用于科研
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
以下是SV-40Z转化肺成纤维细胞;WI38/VA13的订购信息:
产品名称:SV-40Z转化肺成纤维细胞;WI38/VA13
规格:1×10⁶cells/T25培养瓶
货号:FS-02X0553
细胞类型:细胞系
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养*(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养*)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过*易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
AMY2A Others Human 人 AMY2A / Alpha-amylase 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆戊基碳酸酯Cholesterol Amyl Carbonate质量规格:
人肝动脉内皮细胞完全培养基 100mL胆正辛基碳酸酯Cholesterol n-Octyl Carbonate质量规格:
NFS-60细胞,小鼠白血病细胞G-CSF依赖性 HeLa [ Chang Liver ](张氏肝细胞) 非洲绿猴肾细胞;BS-C-1胆己基碳酸酯Cholesterol Hexyl Carbonate质量规格:
XCL2 Protein Human 重组人 XCL2 蛋白 (His 标签)4-(4-乙氧苯氧羰基)苯基碳酸戊酯(>95.0%(HPLC))Amyl 4-(4-Ethoxyphenoxycarbonyl)phenyl Carbonate质量规格:>95.0%(HPLC)
PK-15(猪肾细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV Baculovirus-Insect cells ansfected Lysate (positive corol) (denatured)碳酸丁基4-羧苯酯(>98.0%(T))Butyl 4-Carboxyphenyl Carbonate质量规格:>98.0%(T)
A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株盐酸非索非那定(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Fexofenadine Hydrochloride
EGFR Others Human 人 EGFR / HER1 / ErbB1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸非索非那定质量规格:>98%,BRFexofenadine Hydrochloride
人胚胎皮肤成纤维细胞;HES尼扎替丁(标准品)质量规格:HPLC法含量测定Nizatidine
FaDu细胞,人咽鳞癌细胞 人细胞与仓鼠肺细胞杂交细胞,FD4细胞 CL-0379MCF 7B(人癌细胞)5×106cells/瓶×2醋谷胺/乙酰谷酰胺(标准品)质量规格:含量测定Aceglutamide
仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 Cdna-TGF-β1 Dinding Protein cDNA盐酸伐昔洛韦-d4质量规格:美国进口Valacyclovir-d4, Hydrochloride
仓鼠肺细胞;CHL乙硫异烟胺,硫异烟胺(标准品)amide质量规格:HPLC>98%,标准品
人髓核细胞(HNPC)(5×105)依曲韦林Etravirine质量规格:>98%
CL-0083FaDu(人咽鳞癌细胞)5×106cells/瓶×2法莫替丁Famotidine质量规格:>98%
小鼠垂体瘤细胞;GT1-1 大鼠角膜成纤维细胞完全培养基 100mL法莫替丁(标准品)Famotidine质量规格:含量测定
BIU-87/Adr 人膀胱癌阿霉素耐药株非布索坦Febuxostat质量规格:≥99%
SV-40Z转化肺成纤维细胞;WI38/VA13HUVEC细胞,人脐静脉血管内皮细胞 人肝细胞正常,HL-7702细胞 CL-0072Daudi(人瘤细胞)5×106cells/瓶×2光甘草定质量规格:HPLC≥98%,标准品Glabridin
人APP-PS1双基因转染CHO细胞株;7WPS1鬼臼(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Podophyllotoxin
TFPI Others Human 人 TFPI 人细胞裂解液 (阳性对照) 鬼臼(95%)质量规格:HPLC>95%,BRPodophyllotoxin
肾实质细胞Many types of cells包装:5 ×105方(1ml)鬼臼(85%)质量规格:>85%,BRPodophyllotoxin
TPM4 Others Human 人 TPM4 / opomyosin 4 人细胞裂解液 (阳性对照) β-淀粉样蛋白(25-35)质量规格:>95%,BRβ-Amyloid (25-35)