斐林试剂

注意事项:
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物AB液时,避免使用带金属部分的加样器 。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。

G418溶液

仅供科研实验、不得用于临床

产品名称

规格

货号

斐林试剂

2×100ml

FS-R7726

分类:生化检测
储存条件:室温,避光,6个月
用途:检测葡萄糖
注意事项:等量混合使用,加入待测物内,加热到沸腾,如果有葡萄糖,会形成红色的氧化亚铜沉淀物。
标准溶液配制:
1。先將PH7.00PH4.00藥粉分別倒入250毫升蒸餾水中,充分溶解,用兩支玻璃瓶密封保存,做 好標簽。
2 。在校正前,準備ORP標準溶液。
3 86毫伏:取50100毫升PH7.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。
4 256毫伏:取50100毫升PH4.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。 5ORP標準液保存期為72hour

小鼠脑瘤细胞;BC3H1麦芽糖(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品D-(+)-Maltose monohydrate

CHL1 Others Mouse 小鼠 CHL-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 尿素(标准品)质量规格:含量测定Urea

CM-R106大鼠神经胶质细胞完全培养基100mL生物素(标准品)质量规格:HPLC法含量测定D-Biotin

KYSR450细胞,人食管癌细胞 人XG恶性胶质瘤细胞,SF-295细胞 猪静脉血管内皮细胞;ZYM-SVEC01特非那定(标准品)质量规格:含量测定Terfenadine

CHL(仓鼠肺细胞) 5×106cells/瓶×2(含柠檬酸盐缓冲液)质量规格:>98%,进分Tetrodotoxin
CL-0463UM-UC-3(人膀胱移行细胞癌)5×106cells/瓶×2俾氏麦棕Y250毫克保存:-20

人肾癌细胞;A498 大鼠心肌成纤维细胞完全培养基 100mL2-羌基-5-氧基本加醋 5-Mqthoxysclicylic ccid 61--4

raw264.7 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞BES,wo7iumSALTBES 钠高级100G66992-27-6RT

PLA2G1B Others Mouse 小鼠 Phospholipase-A2 / PLA2G1B 人细胞裂解液 (阳性对照) 葡聚糖凝胶S-300HR7.5KU保存:-20

人导管瘤细胞;UACC812(腐胺)
斐林试剂EREG Others Mouse 小鼠 EREG / epiregulin 人细胞裂解液 (阳性对照) 丙谷二肽,L--谷二肽,力肽Ala-Gln 质量规格:>98%,BR

MDA-MB-231 人癌细胞L-精氨酸甲酯二盐酸H-Arg-OMe·2HCl质量规格:>99%,BR

CL-0369IR983F(大鼠骨髓瘤细胞)5×106cells/瓶×2D-丙氨酰胺盐酸盐D-Alaninamide hydrochloride质量规格:>98%,BR

CSC, 小鼠心肌细胞硝酸芬替康唑; 硝酸芬康唑Fenticonazole Nitrate质量规格:>99%,BR

人胚肺二倍体细胞;HEL-1 人胃粘膜上皮细胞完全培养基 100mL1-苄基D-谷氨酸1-Benzyl D-Glutamate质量规格:0.98
使用方法:
1.  常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,使用浓度为50-1000μg/mL。对于*次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定*筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1  *天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37CO2培养*;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2  根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定501002505007501000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3  第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5  按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3.   稳定转染细胞的筛选
1     转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,*将细胞稀释至丰度不过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3  筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。

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