使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,使用浓度为50-1000μg/mL。对于*次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定*筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) *天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养*;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
仅供科研实验、不得用于临床
产品名称 |
规格 |
货号 |
奥氏试剂 |
100ml |
FS-R7727 |
分类:生化检测
储存条件:室温,避光,6个月
用途:*标准的方法,基于碱性铜盐溶液中金属盐类的还原作用,用碘量法测定奥氏试剂(奥夫纳尔法)与糖液作用生成的氧化亚铜,从而确定样品中的还原糖分。作用类似于斐林试剂。
注意事项:又称奥夫纳尔试剂(Offner试剂),奥夫尼尔试剂。由硫酸铜、酒石酸钾钠、碳酸钠、磷酸氢二钠等组成。
标准溶液配制:
1。先將PH7.00同PH4.00藥粉分別倒入250毫升蒸餾水中,充分溶解,用兩支玻璃瓶密封保存,做 好標簽。
2 。在校正前,準備ORP標準溶液。
3 。86毫伏:取50至100毫升PH7.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。
4 。256毫伏:取50至100毫升PH4.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。 5。 ORP標準液保存期為72hour。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
小鼠膀胱成纤维细胞完全培养基 100mL蔗糖质量规格:分子生物学级Sucrose
AtT-20小鼠垂体瘤细胞 AtT-20 mouse pituitary tumor cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBSD-海藻糖二水质量规格:≥98%,BRD-(+)-Trehalose, dihydrate
IL12B Protein Mouse 重组小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (Fc 标签)亮绿SF(淡黄)质量规格:BSLight Green SF Yellowish
U-118 MG(人脑星形胶质母细胞瘤) 5×106cells/瓶×2 SK-OV-3 [SKOV-3](人卵巢癌细胞)健那绿B质量规格:BSJanus Green B
CM-M012小鼠肺动脉成纤维细胞完全培养基100mL酸性绿3质量规格:BS,进口原装Guinea Green B
A9细胞,皮下结缔组织细胞 人肝星形细胞正常,LX-2细胞 CL-0088H4-IIE(大鼠肝癌细胞 )5×106cells/瓶×25-尿苷质量规格:>99%,BR5-Iodo-Uridine
叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-215--2'-脱氧尿苷(苷)质量规格:>98%,BR5-Iodo-deoxyuridine
FCN1 Others Human 人 Ficolin-1 / Ficolin-A / FCN1 人细胞裂解液 (阳性对照) 5--2'-脱氧胞苷质量规格:>98%,BR5-Iodo-deoxycytidine
神经元细胞Many types of cells包装:5 ×105方(1ml)2'-甲氧基尿苷质量规格:>98%,BR2’-OMe Uridine
NA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人细胞裂解液 (阳性对照) TES. Na;2-[(三(羟甲基)甲基)氨基]-1-乙磺酸钠质量规格:>99%,ARTES
奥氏试剂CM-R002大鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基100mL丙磺舒(标准品)Probenecid质量规格:>98%,标准品
NCI-N87细胞,人胃腺癌细胞 人跟骨髓瘤细胞,Hp2/o细胞 草鱼肾细胞;GIK诺氟沙星Norfloxacin质量规格:>99,USP,BR,可用于细胞培养
DH82(犬巨噬细胞) 5×106cells/瓶×2诺氟沙星(标准品)Norfloxacin质量规格:HPLC>98%,标准品
CA9 Others Human 人 CAIX / CA9 人细胞裂解液 (阳性对照) 诺氟沙星盐酸盐Norfloxacin HCl质量规格:含量大于98.5%
人滑膜细胞RNAHS NA诺氟沙星盐酸盐(标准品)Norfloxacin HCl质量规格:HPLC>98%,标准品
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,*将细胞稀释至丰度不过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。