HBMEC人脑微血管内皮细胞建系鉴定于1980年（叶秀珍等，1980)。该细胞是一株正常肝细胞系，具有典型的肝细胞形态学特征，可用于多种实验研究。  

培养体系（详情索取说明书）

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 

温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%

传代方法：1:2-1:4 

传代情况：2天换液

备注：收集瓶中培养基，过渡使用。

HBMEC人脑微血管内皮细胞收到后处理

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）

细胞培养步骤

复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入6cm皿中）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱培养后查看细胞密度：若密度未过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度过80%，可直接进行传代（方法同上）。

HBMEC人脑微血管内皮细胞传代注意事项：胰酶消化的过程至关重要。消化过度细胞会粘连拉丝，严重影响细胞活性和后期状态；消化不完全则细胞难以从瓶壁自行脱落，反复对细胞表面进行吹打会损伤细胞活性，导致细胞后期状态差、增值能力低下以及细胞形态发生改变。影响消化的因素有很多，主要包括胰酶溶液的活性（配置条件、低温保存时间长短、是否反复冻融，解冻后的存放时间及温度等）、消化细胞时的温度（建议在37°培养箱中消化）、胰酶所加的量（以T25为例，一个T25加1ml胰酶）、细胞的密度（同株细胞不同密度下胰酶对细胞的消化时间也不同，密度稀消化时间快，密度大消化时间相对较慢）等。不同细胞对胰酶的敏感性也不同，对于新购买的细胞，建议客户用含0.25EDTA的胰酶消化液先培养箱持续消化1-2min，镜下观察细胞是否变圆，直至细胞完全脱落或轻拍瓶壁完全脱落，记录佳消化时间，下一次操作参考之前记录来控制时间即可。

售后服务告知书

一、收到细胞处理方法

1. 收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置若干小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100×，200×各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行售后的依据。

2. 收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费重发一次细胞。

3. 由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素的影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后是需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后与客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。

4. 如客户对细胞的种类、纯度、活性等特性有疑问，需提供相应的生物学实验检测结果作为依据。

二、细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；

3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；

5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；

6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。

关于细胞STR鉴定简介：细胞STR鉴定应用于生物医学研究领域的哺乳动物细胞被错误鉴定和交叉污染的问题，一直是一个普遍存在的突出问题。

据统计，国外实验室有20%左右的细胞株被错误鉴定和交叉污染，NIH和ATCC近两年都对此发出呼吁，要求研究者对细胞进行鉴定。近年来，大量研究表明STR基因分型方法是进行细胞交叉污染和性质鉴定的有效和准确的方法，STR基因分型应用于细胞鉴定已被ATCC等机构强烈。美国的ATCC细胞库、德国的DSMZ细胞库以及日本的JCRB细胞库等为STR分型提供了各细胞株的数据供比对。

STR（Short Tandem Repeat，短串联重复序列）基因位点由长度为3-7个碱基对的短串连重复序列组成，这些重复序列广泛存在于人类基因组中，可作为高度多态性标记，被称为细胞的DNA指纹，其可通过PCR（聚合酶链式反应）来检测。STR基因座位上的等位基因可通过扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来区分，在毛细管电泳分离之后可通过荧光检测来识别。随后通过一定的计算方法，即可根据所得的STR分型结果与的细胞STR数据库比对从而推算出样品所属的细胞系或可能的交叉污染的细胞系名称。

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