温育是ELISA测定*为关键、*容易出现问题的步骤。*为常见的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2-8℃。目前国内售ELISA试剂盒温育时间为37℃，30 min-1 h，进口ELISA试剂盒则通常为37℃，1-2 h能有较完全的结合。
1、温育时间、温度的选择一般根据试剂盒的说明书选择温育的时间、温度。加完样本和（或）试剂后将微孔板从室温放入水浴箱或温箱中时，孔内温度从室温升至37℃需要一定时间，如果是将微孔板一放入温箱即开始计时，这样就容易造成实际测定中温育时间不够，易致弱阳性标本测不出来。控制方法：
①如有两种温度，尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件；
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察。
2、 “边缘效应”的排除“边缘效应”是在使用96孔板的ELISA测定中，外周孔显色较中心孔深的现象。产生的原因可能是为96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度造成的，因此在温育时尽量采用水浴。
