ELISA实验结果的操作事项

阅读:发布时间:2023-05-16

ELISA实验结果的操作事项如下:

1、严格按照试剂说明书进行操作。


2、检测前应将试剂放置室温平衡半小时,洗涤液应现用现配,同时观察浓缩洗涤液中有无结晶,若有结晶应放37℃水浴中融化后方可使用。加入底物TMB时应注意有无颜色变化,若已显色则可能过期或变质,也不可使用。


3、加样后及时放入孵育箱。标本较多时,要分批操作。按照说明书步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。


4、封板温育时,各孔一定要封严,防止阳性标本的液体蒸发,不会引起孔间的污染,产生周边现象从而导致“花板“的出现。


5、应保证酶标版清洁,整个操作过程中保证酶标版不接触次氯酸。


6、加酶试剂后用吸水纸在酶标版表面轻拭吸干。


7、合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。


8、手动洗板时,加洗液要快速,没有多道移液器可以使用洗瓶。洗液应新鲜配制,以免被其他试剂污染,或染菌。加好洗液后浸泡 30s-1min。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水纸上拍板,选用无粉尘和碎屑的吸水纸。需要用力拍板,使孔内没有可见液体挂壁;但也不能太重,不能让样品干太久。酶标板拍干后立即做后续的加液。


9、用洗板机洗板时,保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完版后在吸水纸(选择干净,无尘的吸水材料)上轻轻拍干。若血清中的纤维蛋白或洗涤液中有结晶,将堵塞洗板机针孔,造成全堵或半堵状态,以致使未结合的酶标记物不能*洗脱,而使*底物显色时加深,造成假阳性或花板。废液瓶装满后应及时清空,以防止废液回流对管道的污染,而使洗涤不*,造成花板。洗板结束后应用蒸馏水*清洗管道,以防止废液在管道中的残留。洗涤次数及加液量不可*按照试剂说明书设定,应根据本实验室的实际情况来设定,开展新项目前,应做好验证工作,根据洗涤的效果来决定洗涤的次数和加液量。同时应根据仪器维护保养程序,定期对洗板机进行维护保养。


10、加样量的准确与否,直接影响抗原抗体结合物的浓度,直至*显色的深浅。吸嘴插入血清不可太深,若插入太深,吸嘴外壁可能粘连太多血清,轻微的抖动动即可将吸咀外壁的血清溅入其它包被孔中,造成交叉污染。加样时应尽可能的垂直加样,并加在包被孔的底部,不可加在孔的上部。标本量大时,可考虑使用排枪加试剂,可提高速度,但使用排枪时应注意吸嘴一定要装好,不可松动,否则会影响加样量的准确度。加样时保持显色剂不外流,显色剂应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。


11、加样时间间隔对结果也有一定的影响,在竞争抑制法试验中,理论上应该是标本与酶标抗体混合后同时加入反应孔,若标本先于酶标抗体加入反应孔,则标本会先与包被抗体进行反应,造成特异性假阳性。若是有干扰物质存在时表现明显,在公平条件下,干扰物质与包被抗体的结合能力会低于标本,而在非公平条件下,干扰物质会优先与包被抗体进行结合,出现假阳性。做HBcAb项目时,若标本与酶加样时间间隔太长,会引起吸光度的趋势性变化,会造成吸光度的降低。特别是针对临界值标本,出现假阳性。


12、洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液,各种试剂盒的洗液不要混用。洗液需要稀释时,应按要求稀释。配制洗液应用新鲜的和高质量的纯水或双蒸水,电导率小于1.5μS/cm,洗液如果结晶应待其溶解后配制。配制后要测定其pH值,使其范围在7.2-7.4之间。



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