elisa实验测定方法

阅读:发布时间:2023-03-08

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗C3抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗C3抗体、HRP标记的亲和素,经过洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的C3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。


1.定性测定


(1)ELISA试剂盒阳性判定值法(cut-offvalue,CO值):一般为阴性对照的平均A值加一个常数,试剂制备严格标准化,要先计算出阳性对照A值平均数和阴性对照A值平均数。标本A值≥CO值即为阳性。


(2)抑制率法:在竞争抑制法中结果可用抑制率表示。


抑制率(%)=(A阴性对照A-A待测)/阴性对照X100%,一般以抑制率≥50%为阳性试剂盒。


2.半定量测定


结果一般以滴度表示。将标本连续稀释后,进行ELISA检测,在阳性临界值以上的稀释度即为该标本的“滴度”。


3.定量测定


即用己知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA试剂盒测定,与待测标本同时进行测定,绘制标准曲线,结果以*量或活性单位表示之。



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