冻存细胞的复苏:
1、液氮罐中取出冻存管,确认冻存管标签,37℃水浴,避免水没过管帽,持续摇动, 1分钟内即可融化。(注意液氮中取出后,避免长时间暴露于常温,或令其缓慢回温,此举可致细胞死亡率严重增加)。
2、冻存管内细胞悬液转移入离心管,以5ml/min(通常冻存管为2ml体系,则在半分钟左右再加入2ml培养基)的速度缓慢加入培养基,开始时逐滴加入,随后可渐加快,逐步稀释细胞和DMSO。
3、一定转速离心10min,去上清液;
4、培养基重新悬浮细胞沉淀,接种细胞至培养瓶;
5、24h后观察并确认细胞贴壁;
6、定期更换培养液,直至细胞系重新建立。