ELISA实验主要的五种方法实验原理

阅读:发布时间:2022-10-17

酶联免疫吸附测定(enzyme ed immunosorbent assay,简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。主要有 5 种方法:双抗夹心法、竞争法、直接法、间接法、捕获法实验原理。


1、双抗夹心法:适用于大分子物质的检测。将已知的可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体表面,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法,具有快速、灵敏、简便等优点。


2、竞争法:竞争法适用于较少表位的小分子物质。将抗体包被于微孔板中,加入无关蛋白载体封闭未结合位点,加入标准品和生物素标记的抗原物质进行竞争结合。


3、直接法:主要用于抗原的检测,将抗原直接固定在固相载体上,洗涤后加入酶标特异性抗体,洗涤后加入底物显色,该方法对抗体的特异性要求较高。


4、间接法:主要用于抗体的检测。将特异性抗原包被在固相载体表面,与标本中相应特异性抗体结合,洗涤后加入酶标的抗体,洗涤后加入底物显色。该方法对抗原的特异性要求较高。


5、捕获法:捕获法主要用于血清中某种抗体亚型的检测。先将针对 IgM的第二抗体连接与固相载体,用以结合样品中的所有 IgM,洗涤除去 IgG等无关的物质,然后加入特异性抗原与待检 IgM结合,再加入抗原特异的酶标抗体,*形成固相二抗-IgM-抗原-酶标抗体复合物,加酶底物显色即可对样品中待检 IgM是否存在及其含量进行测定。

上一篇:抗体的鉴定
下一篇:PCR基本反应步骤构成