|
方法 |
概念 |
优点 |
缺点 |
适用场景 |
|
直接法 |
让酶偶联会在表面结合抗原的抗体。 |
实验步骤少，可简化试验。 |
1.需要制备在每个实验中用来检测的各种偶联抗体。 2.包被抗原会非特异性地结合表面，因此他可能会在非天然结构中被呈递给抗体从而导致更强的背景信号。 |
1.适合测定样品中的抗体量，比如感染后的血清抗体水平；2.不适合多种抗体的分析。 |
|
间接法 |
类似于直接ELISA，但不偶联抗体。使用第二偶联抗体来检测结合的抗体。 |
1.在所有不同的实验中使用相同物种的结合抗体的情况下，可以使用偶联的第二抗体来进行多个实验。 2. 由于二抗一般分为多抗，因此，一个一抗分子上可以结合多个二抗分子。同时，一个二抗分子上可以标记多个酶分子，所以当待测抗体为多抗时，信号经过两步放大，*终提高了检测的灵敏度。 3.由于二抗制备比较容易，而且很早就开始商品化，所以操作者无需将一抗进行酶标，大大缩减了工作量。 |
1.实验步骤耗时更长，更容易出错。 2.会有更强的背景信号，因为所需的试剂数量更多，每一种都可能会出现非特异性结合。 |
1.检测抗体的效价，血清的效价以及单克隆抗体的筛选。 2.检测标志性抗体。 |
|
直接夹心法 |
直接将抗原固定在固相上。 |
更具有特异性。 |
需要开发适合实验的“匹配组”抗体，费钱且耗时。 |
只能用于识别具有两个或两个以上标位的抗体。 |
|
间接夹心法 |
将捕获抗体固定在固相上以捕获抗原。 |
1.进一步放大了信号，提高了灵敏性。 2.由于酶标二抗仅能识别检测抗体，提高了体系的特异性。 |
配置“实验组”费钱且耗时。 |
只能用于识别具有两个或两个以上标位的抗体。 |
|
竞争法 |
让抗体竞争性的或抑制抗体结合实测数量的抗原来进行定量。 |
检测速度快。 |
需要较多量的酶标记抗原。 |
只有一个结合部位的抗原，对小分子抗原如激素和药物等的测定常用这种方法。 |
