到底elisa试剂盒原理是什么

到底elisa试剂盒原理是什么？

免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何的诊断试剂离不开的原料,如抗原抗体,酶等。以前用于
免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗
原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的
抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种使用的测定方法也不断出现。HBsAg试剂特点（检测模
式：临床抗体夹心法）：包被抗体为山羊多抗。多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性。酶表抗体为与HBsAg有不同结合位
点的鼠复合单位,可测得HBsAg变异样品,提高检测的特异性（99。98%）提高检测的灵敏度,应用Parl Ehrich 学说（PEI）HBsAg标
准品,对ad标准品的灵敏度为0。05ng/ml对ay标准品灵敏度为0。025ng/mlELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的
HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和
开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗体,这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗
板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物
就会与次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应
,只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在长:450nm
处测量O.D。值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒的测试标准,O.D。值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。

操作方法：
双抗体夹心法：
1、包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 
隔夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2、加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及
阳性对照孔）。
3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜
色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零
后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法:
1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃隔夜；
2、次日洗涤3次；
3、加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；
4、（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；
6、一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

优势试剂：
人钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)ELISA检测试剂盒
山羊白介素12B(IL12B)ELISA酶免试剂盒
人硫酸雌酮(E1S)ELISA试剂盒使用
人单核细胞增多性李斯特菌素O((LLO)ELISA试剂盒
犬孕酮(P)ELISA试剂盒,96T/48T,KB13743
小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)ELISA酶免试剂盒,Mice keyhole limpet hemocyanin (KLH) ELISA kit
鸭病毒性肠炎病毒(DEV)ELISA酶免试剂盒
小鼠绒毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA试剂盒使用
人甲状旁腺激素(PTH)ELISA试剂盒,96T/48T,KB12481
山羊转化生长因子β3(TGFβ3)ELISA试剂盒
大鼠D乳酸脱氢酶(DLDH)ELISA试剂盒,96T/48T,KB15764
人孕酮受体(PGR)ELISA试剂盒,96T/48T,KB12077
人促黄体激素(LH)ELISA酶免试剂盒
小鼠骨桥素(OPN)ELISA试剂盒
大鼠胶原酶I(CollagenaseI)ELISA酶免试剂盒
人可溶性CD276分子(sCD276/sB7H3)ELISA酶免试剂盒,Human soluble CD276 molecule (sCD276 / sB7H3) ELISA kit
人叉头框蛋白01(FoxO1)ELISA试剂盒使用
人E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒
人溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA测定试剂盒,96T/48T
人抗谷氨酸脱羧酶抗体(Anti-GAD)ELISA酶免试剂盒,Human glutamic acid decarboxylase antibody (Anti-GAD) ELISA kit.
兔子Ⅰ型胶原(ColⅠ)ELISA酶免试剂盒
鸡免疫球蛋白MELISA测定试剂盒,96T/48T
小鼠16α羟基雌酮1(16-αOHE-1)ELISA检测试剂盒
人Ⅱ型胶原交联C端肽(CTXⅡ)ELISA酶免试剂盒,People Ⅱ collagen cross-linked C-telopeptide (CTXⅡ) ELISA kit
牛β乳球蛋白(βLg)ELISA测定试剂盒,96T/48T
小鼠血管紧张素转化酶(ACE)ELISA测定试剂盒,96T/48T
人白介素18(IL-18)ELISA试剂盒,96T/48T,KB10711
小鼠P选择素(P-Selectin/CD62P)ELISA试剂盒使用
山羊补体蛋白3(C3)ELISA检测试剂盒
兔子谷胱甘肽(GSH)ELISA测定试剂盒,96T/48T
大鼠β-防御素(β-Defensins)ELISA酶免试剂盒,Rat βdefensin (β-Defensins) ELISA kit.
牛白介素-12(IL-12)ELISA酶免试剂盒
猪白介素12(IL12)ELISA检测试剂盒
牛白介素15(IL15)ELISA试剂盒,96T/48T,KB16242
兔抗脑组织抗体(ABAb)ELISA试剂盒使用
猴过氧化氢酶(CAT)ELISA酶免试剂盒,Monkey catalase (CAT) ELISA kit
犬α1微球蛋白(α1MG)ELISA检测试剂盒