【概要】
黄曲霉毒素(Aflatoxin)是黄曲霉、寄生曲霉等真菌产生的次级代谢产物，被世界卫生组织的癌症研究机构划分为Ⅰ类致癌物，同时又是一种毒性极强的剧毒物质，广泛存在于各种食物中。玉米，花生，大米，小麦等谷物及其副产品是黄曲霉毒素的主要来源，同时饲料中的黄曲霉毒素B1经过动物代谢后产生的黄曲霉毒素M1仍然具有很强的毒性和致癌性，也广泛存在牛奶，血液，组织等食品中。黄曲霉毒素作为肝癌的三大诱因，也是诱发胃癌，肠癌等疾病的主要原因，对人类的健康构成很大威胁。世界各国对食品，饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。
【适用范围及性能】
用于定性、定量检测谷物、副食品、酒类等食品和饲料等样本中的黄曲霉毒素量B1时的样品前处理。
柱容量：≥200ng
回收率：≥90%
【试验原理】
本产品的测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的黄曲霉毒素B1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过黄曲霉毒素B1免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素B1，然后注入到分析仪器中用于检测。
【包装组成】
根据不同规格，每一个盒中包含5/25支黄曲霉毒素免疫亲和层析柱及1份说明书。
【需要而未提供的设备及试剂】
设备：
1. 高速均质器或组织匀浆机
2. 粉碎机
3. 200mL/50mL量筒
4. 天平：感量0.1g
5. 微量移液器：单道 100mL～1000mL
6. 槽纹滤纸(折叠快速定性或定量滤纸)
7. 玻璃微纤维滤纸(1.5mm孔径)
8. 50mL漏斗
9. 一次性玻璃试管
10. 泵流操作架(包括空气泵，不同容积的玻璃注射器等)
试剂：
1. 甲醇(色谱级)
2. 蒸馏水或去离子水
3. pH7.0磷酸盐缓冲溶液(PBS)：称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，*用纯水稀释至1000mL
4. 吐温-20/PBS溶液(0.1%)：取1mL吐温-20，加入PBS缓冲溶液并定容至1000mL
【试剂配制】
样品提取液：根据不同的样品配置不同浓度的甲醇水溶液，作为样品提取液。
【样本处理步骤】
(一)花生，玉米，大米，小麦及其制品，植物油脂和饲料
1. 取25g粉碎的样品(植物油脂直接取样，无需处理)与125mL甲醇-水(7：3)溶液混合;
2. 加入5.0g氯化钠以均质器高速搅拌，提取2min;
3. 4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤;
4. 取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，取稀释后液体待测;
5. 将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确移取15.0mL样品提取液注入玻璃注射器;
6. 将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体;
7. 以10.0mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体;
8. 准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
(二)酱油
1. 取50g试样与100mL甲醇-水(8：2)溶液混合;
2. 加入2.5g氯化钠以均质器高速搅拌，提取1min;
3. 4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤;
4. 取10mL滤液并加入40mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤;
5. 取稀释后液体待测;
6. 将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器;
7. 将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体;
8. 用10.0mL 0.1%的吐温/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体;
9. 准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
(三)食醋
1. 取5g试样，加入1.0g氯化钠;
2. 以pH7.0磷酸盐缓冲溶液稀释定容至25.0mL;
3. 4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤;
4. 取10mL滤液并加入10mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤;
5. 取稀释后液体待测;
6. 将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器;
7. 将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体;
8. 用10.0mL 0.1%的吐温/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体;
9. 准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
【结果判定】
经免疫亲和柱净化后，收集到的甲醇洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测，也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。收集到的1mL洗脱液中的黄曲霉毒素B1含量相当于1g样品中黄曲霉毒素B1含量。
【高效液相参考谱图】
【注意事项】
1. 黄曲霉毒素危害极大，应戴手套操作;
2. 使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液*用5%浓度次氯酸钠溶液浸泡*;
3. 不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
【贮藏条件及保存期】
贮藏条件：亲和柱可于常温保存，2-8℃储存可延长有效期，不可冻存
保存期：该产品有效期为12个月。
