细胞名称：HTMC，人眼小梁网细胞

种属来源：人

组织来源：眼

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基:：90%DMEM-F12+10% FBS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

传代方法：1:2 至 1:3，每周 3 次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

细胞用途：仅供科研使用。

1） 复苏细胞：将含有 1 mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL 培养基混合均匀。在 1000 rpm 条件下离心 3 min，弃去上清液，加 1-2 mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养*（或将细胞悬液加入 10 cm 皿中，加入约 8 mL 培养基，培养*）。第2天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

b、加 1 mL 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于 37℃培养箱中消化 1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按 6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm 离心 4 min，弃去上清液，补加 1-2 mL 培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8 mL 培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面 T25  瓶为例：

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm 条件下离心 4 min，弃去上清液，用 PBS 清洗一遍，弃尽 PBS，加 1 mL 血清重悬细胞，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度 5×10^6~1×10^7/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存 1mL 细胞悬液，注意冻存管做好标记。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h 后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。