产品基本信息

细胞名称：MCF-7，人乳腺癌细胞

种属来源：人

组织来源：乳腺、胸；分离自转移灶：胸腔积液

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基: MEM 88%，FBS 10%，Glutamax 1%，Non-essential Amino Acids, 100X  1%，Sodium Pyruvate 100 mM Solution  1%，human recombinant insulin 终浓度0.01 mg/ml。

生长条件：气相：95%空气+5% 二氧化碳；温度：37℃ 

传代方法：传代周期5-7天，传代比例1：3

冻存条件：完全培养液95% + DMSO5%，液氮储存

支原体检测：无

细胞培养操作

1）复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养*（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养*）。第二天换液并检查细胞密度。

注意：a) 该细胞贴壁较慢，建议复苏、传代后让细胞贴壁48-72h后再进行后续实验操作。 b) 使用0.25%(w/v) Trypsin-0.53 mM EDTA消化细胞。 c) MCF7是一种生长缓慢的细胞系，它会以松散的三维团簇的形式出现，并伴有一些漂浮的活细胞。悬浮的活细胞可以通过离心后重新加入到培养瓶中培养。在复苏后前二代该细胞会出现贴壁缓慢的情况，是正常现象。松散的三维团簇细胞慢慢会扩散形成一个扁平的单层细胞。如果生长速度比正常情况慢，可以尝试另一批FBS（即血清批次的促生长能力可能不同）。此外，将血清浓度增加到20％也可能有助于改善生长。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

将细胞悬液按1：2~3比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，加 1 mL血清重悬细胞，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。