二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)测试盒100管/96样

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产品名称:二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)测试盒100管/96样
检测方法:微量法
产品规格:100管/96样
产品货号:BH-9611388-1
产品分类:光合作用系列

商品介绍:

测定意义:

核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一个关键酶,既控制着CO2的固定,同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流,其活性的大小直接影响着光合速率。

测定原理:

Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)与1分子的CO2结合,产生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA),PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用,产生甘油醛-3-磷酸,并使还原型辅酶I(NADH)氧化。因此,340nm吸光度的变化可计算还原型辅酶I氧化速率,还原型辅酶I氧化速率可反应Rubisco的活性。

需自备的仪器和用品:

分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体 200μL×1 支,4℃保存;

试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃保存;

试剂四:粉剂×2 瓶,4℃保存。


产品优点如下:

1、快速简便:全程约2小时,可测50例左右样本。

2、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。

3、再现性好:变异系数CV=1.7%。

4、回收试验: X =97%。

5、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。

6、测试面广:可测动物血清(浆)、组织等。

通用规则:

1、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

2、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

3、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。

4、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。

5、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。

6、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。

7、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。

8、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

9、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。

10、底物是光敏感的,要在临用前现配。

注意事项:

①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:

① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。

② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。

③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。

④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。

⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

样品的准备:

细胞样品的准备:对于贴壁细胞,吸净细胞培养液,用4℃或冰浴预冷的PBS或生理盐水洗涤一遍,按照每100万细胞加入100~200μL的比例加入本试剂盒提供的SOD样品制备液,适当吹打以充分裂解细胞;对于悬浮细胞,600g离心5分钟收集细胞,用4℃或冰浴预冷的PBS或生理盐水洗涤一遍,按照每100万细胞加入100~200μL的比例加入SOD样品制备液,适当吹打,以充分裂解细胞。4℃约12000g离心3~5分钟,取上清作为待测样品。

组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl,含有0.16mg/ml肝素钠)灌流清除血液后获取组织样品。取适量的组织样品,按照每10mg组织加入100μL SOD样品制备液的比例在4℃或冰浴进行匀浆(可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器)。4℃约12000g离心3~5分钟,取上清作为待测样品。

血浆或红细胞样品的准备:用抗凝管收集血液,颠倒混匀。4℃ 600g离心10分钟,移取上清至另一新的1mL离心管中,适量生理盐水稀释后即可作为血浆样本进行检测。红细胞样品可以参考步骤1a悬浮细胞样品的制备方法,或其它不含Triton X-100等去垢剂的样品制备方法。

上述样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。通常10~20μg蛋白的细胞或组织匀浆液样品中的SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考)。每种样品准备20~100μg蛋白量通常已经足够用于后续检测。

根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用本试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏组织10%匀浆液(组织和匀浆液的重量比为1:10)上清,通常需要稀释10~100倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

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猴头菌(猴头蘑、猬菌)色c氧化1抗体Human FAM160B2 酶联免疫试剂盒兔子免疫球蛋白G(IgG)免疫试剂盒

黑曲霉表面趋化因子受体4相关蛋白4抗体Human FAM160B1 酶联免疫试剂盒兔子免疫球蛋白E(IgE)免疫试剂盒

节杆菌属表面趋化因子受体4相关蛋白6抗体Human FAM164C 酶联免疫试剂盒兔子免疫球蛋白A(IgA)免疫试剂盒

苏云金芽孢杆菌表面趋化因子受体4相关蛋白8抗体Human FAM116B 酶联免疫试剂盒兔子硫氧化还原蛋白(Trx)免疫试剂盒

枯草芽孢杆菌硫软骨抗体Human FAM114A1 酶联免疫试剂盒兔子硫软骨(CS)免疫试剂盒

球孢白僵菌上皮类癌相关抗原抗体Human FAM117B 酶联免疫试剂盒兔子硫类肝(HS)免疫试剂盒

马链球菌马亚种磷化蛋白磷激PKC/CPI-17抗体Human FAM168B 酶联免疫试剂盒兔子硫角质(KS)免疫试剂盒

柱状田头菇(茶树菇、杨树菇)着丝粒蛋白KHuman FAM118B 酶联免疫试剂盒兔子可溶性粘附分子(Sam)免疫试剂盒

Geobacter肿瘤/抗原1BHuman FAM119A 酶联免疫试剂盒兔子可溶性血管粘附分子1(sVCAM-1)免疫试剂盒

苏云金芽孢杆菌转铁蛋白受体抗体Human FANCM 酶联免疫试剂盒兔子可溶性血管内皮蛋白C受体(sEPCR)免疫试剂盒

枯草芽孢杆菌8号染色体开放阅读框K29抗体Human FAM76A 酶联免疫试剂盒兔子可溶性P选择(sP-selectin)免疫试剂盒

大肠埃希菌色P450 3A4抗体Human FARS2 酶联免疫试剂盒兔子可溶性E选择(sE-selectin)免疫试剂盒

*百脉根根瘤菌色CYP2D1抗体Human FARSA 酶联免疫试剂盒兔子可溶性CD40配体(sCD40L)免疫试剂盒

鸭肝炎病CD33抗体Human FAM84B 酶联免疫试剂盒兔子抗中性粒颗粒抗体(ANGA)免疫试剂盒

枯草芽孢杆菌视网膜母瘤结合蛋白8抗体Human FAM78A 酶联免疫试剂盒兔子抗凝血Ⅲ抗体(AT-Ⅲ Ab)免疫试剂盒

链霉菌属菌种Streptomyces│sp. 质量规格:>98%,BRToll作用蛋白试剂盒鸟

Staphylococcus│aureus 质量规格:>98%,BRToll样受体9试剂盒L-鸟盐盐

: IFFI2317资源名称: 黑曲霉 质量规格:>98%,BRToll样受体7试剂盒鸟苷
二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)测试盒100管/96样EBv IgA(Human epstein-barr virus IgA) ELISA Kit  人EB病毒IgA规格: 48T

EBv IgG(Human epstein-barr virus IgG) ELISA Kit  人EB病毒IgG规格: 48T

Human Leishimaria antibody ELISA Kit  人利什曼原虫规格: 48T

DF-Ab(Human dengue fever antibody) ELISA Kit  人登革热规格: 48T

FLU(Human Influenza viruses IgG) ELISA Kit  人流感病毒IgG规格: 48T

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