使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,使用浓度为50-1000μg/mL。对于*次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定*筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) *天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养*;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
仅供科研实验、不得用于临床
产品名称 |
规格 |
货号 |
IEF电极缓冲液 |
2×500ml |
FS-R7506 |
分类:蛋白电泳
储存条件:室温,12个月
用途:蛋白质组学电泳
注意事项:含阳极缓冲液和阴极缓冲液各一瓶,5倍稀释后使用。
标准溶液配制:
1。先將PH7.00同PH4.00藥粉分別倒入250毫升蒸餾水中,充分溶解,用兩支玻璃瓶密封保存,做 好標簽。
2 。在校正前,準備ORP標準溶液。
3 。86毫伏:取50至100毫升PH7.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。
4 。256毫伏:取50至100毫升PH4.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。 5。 ORP標準液保存期為72hour。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
兔II型前胶原C端肽(rabbit PIICP) 作用: ELISA 规格: 48T/96T 进口分装 4-Androstenediol 1156-92-9 中文名:4-雄烯二醇 分子式:C19H30O2 度:95.0% 关键词:
兔II型胶原C端肽(rabbit CTX-II) 作用: ELISA 规格: 48T/96T 进口分装 4-Androstenediol 中文名:4-雄烯二醇 分子式:C19H30O2 度:95.0%
兔II型胶原(rabbit Collagen II) 作用: ELISA 规格: 48T/96T 进口分装 4-Aza-5androstan-1-ene- 3-one-17carboxylic acid 140700-63-6 中文名: 分子式:C19H27NO3
兔elisa试剂盒 兔试剂盒 规格型号:96T/48T 兔试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:兔试剂盒、兔elisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。 5-Hydroxymethylfurfural 67-47-0 中文名:5-羟甲基糠醛 分子式:C6H6O3 度:% 关键词: 抗菌; 山茱萸; 黄精; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
兔D2聚体(rabbit 2-Dimer) 作用: ELISA 规格: 48T/96T 进口分装 4-Androstenediol 中文名:4-雄烯二醇 分子式:C19H30O2
Cryptotanshinone 中文名:隐丹参酮 分子式:C19H20O3 度:98.0% 兔载脂蛋白B100(apo-B100)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Dihydroisotanshinone II 中文名: 分子式:C18H14O3 度:98.0% 兔转化生长因子β2(TGFβ2)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Tanshinone IIA 中文名:丹参酮IIA 分子式:C19H18O3 度:98.5% 兔载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
2,6-Dimethoxy-1-acetonylquinol 中文名: 分子式:C11H14O5 度:% 兔载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Latinone 中文名: 分子式:C22H16O5 度:98.0% 兔诱导型合成酶(iNOS)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
IEF电极缓冲液猪白介素10(IL-10)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Tenacissoside I 191729-44-9 中文名:通关藤苷I 分子式:C44H62O14 度:% 关键词: 通关藤; 孕甾烷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
猪白介素1(IL-1)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Tenacissoside I 191729-44-9 中文名:通关藤苷I 分子式:C44H62O14
猪白介素1(IL-1)ELISAKit ELISA. 96T/48T Tenuifoliside A 中文名:远志蔗糖酯A 分子式:C31H38O17 度:95.0%
猪γ干扰素elisa试剂盒 猪γ干扰素试剂盒 规格型号:96T/48T 猪γ干扰素试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:猪γ干扰素试剂盒、猪γ干扰素eisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。 Tenacissoside G 191729-43-8 中文名:通关藤苷G 分子式:C42H64O14
猪γ干扰素 英文名称: Porcine γ Ierferon 规格: 48T/96T 英文缩写: γ IFN Temozolomide 85622-93-1 中文名:替莫唑胺 分子式:C6H6N6O2 度:99.0%
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,*将细胞稀释至丰度不过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。