TEA-Tricine-SDS电泳粉剂

使用方法:
1.  常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,使用浓度为50-1000μg/mL。对于*次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定*筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1  *天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37CO2培养*;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2  根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定501002505007501000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3  第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5  按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3.   稳定转染细胞的筛选
1     转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
仅供科研实验、不得用于临床

产品名称

规格

货号

TEA-Tricine-SDS电泳粉剂

1L

FS-R7507

G418溶液

分类:蛋白电泳
储存条件:室温,24
用途:sigmaPCG3001预制胶电泳缓冲液粉剂
注意事项:英文名称为:TEA Tricine SDS Running Buffer,其中TEA特指三乙醇胺
标准溶液配制:
1。先將PH7.00PH4.00藥粉分別倒入250毫升蒸餾水中,充分溶解,用兩支玻璃瓶密封保存,做 好標簽。
2 。在校正前,準備ORP標準溶液。
3 86毫伏:取50100毫升PH7.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。
4 256毫伏:取50100毫升PH4.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。 5ORP標準液保存期為72hour

注意事项:
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物AB液时,避免使用带金属部分的加样器 。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
II型前胶原C端肽(rabbit PIICP)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装  4-Androstenediol  1156-92-9  中文名:4-雄烯二醇  分子式:C19H30O2  度:95.0%  关键词:  

II型胶原C端肽(rabbit CTX-II)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装  4-Androstenediol  中文名:4-雄烯二醇  分子式:C19H30O2  度:95.0%

II型胶原(rabbit Collagen II)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装  4-Aza-5androstan-1-ene- 3-one-17carboxylic acid  140700-63-6  中文名:  分子式:C19H27NO3  

elisa试剂盒   兔试剂盒   规格型号:96T/48T   兔试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:兔试剂盒、兔elisa试剂盒   保存条件:2-8℃   保质期:6个月。  5-Hydroxymethylfurfural  67-47-0  中文名:5-羟甲基糠醛  分子式:C6H6O3  度:%  关键词:  抗菌; 山茱萸; 黄精; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

D2聚体(rabbit 2-Dimer)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装     4-Androstenediol  中文名:4-雄烯二醇  分子式:C19H30O2
Cryptotanshinone  中文名:隐丹参酮  分子式:C19H20O3  度:98.0%  兔载脂蛋白B100(apo-B100)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Dihydroisotanshinone II  中文名:  分子式:C18H14O3  度:98.0%  兔转化生长因子β2(TGFβ2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T            

Tanshinone IIA  中文名:丹参酮IIA  分子式:C19H18O3  度:98.5%  兔载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

2,6-Dimethoxy-1-acetonylquinol  中文名:  分子式:C11H14O5  度:%  兔载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

Latinone  中文名:  分子式:C22H16O5  度:98.0%  兔诱导型合成酶(iNOS)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
TEA-Tricine-SDS电泳粉剂Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA试剂盒规格:96T/48T  2-[(Acetylthio)methyl]-phenylpropionic acid  中文名:  分子式:C12H14O3S  

Rabbitai-Monocyteaibody,AMAELISAKit兔抗单核细胞抗体(AMA)ELISA试剂盒规格:96T/48T  2-Amino-5-nitrobenzophenone  中文名:2-氨基-5-硝基二苯甲酮  分子式:C13H10N2O3  

Rabbitai-glycoproteinaibody,GPELISAKit兔抗糖蛋白抗体(GP)ELISA试剂盒规格:96T/48T  2-Amino-4-methylbenzothiazole  1477-42-5  中文名:2-氨基-4-甲基苯并噻唑  分子式:C8H8N2S  

Rabbitai-braiissueaibody,ABAbELISAKit兔抗脑组织抗体(ABAb)ELISA试剂盒规格:96T/48T  2-Amino-3-methylbenzoic acid  4389-45-1  中文名:2-氨基-3-甲基苯甲酸  分子式:C8H9NO2  

rabbitadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit兔子促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA试剂盒规格:96T/48T  2-[(6-Chloro-3,4-dihydro-3-methyl-2,4-dioxo-1(2H)-pyrimidinyl)methyl]benzonitrile  865758-96-9  中文名:  分子式:C13H10ClN3O2

注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,*将细胞稀释至丰度不过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3  筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。

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