注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
仅供科研实验、不得用于临床
产品名称 |
规格 |
货号 |
酮粉试剂 |
15g |
FS-R7733 |
分类:生化检测
储存条件:室温,12个月
用途:主要用于定性鉴定人、动物肝组织、肌肉组织等中酮体情况
注意事项:由亚硝基铁*、碳酸钠、硫酸铵组成,以辛酸钾为底物,所产生的酮体在有铵离子存在的碱性环境中,与亚硝基铁*作用生成紫色化合物
标准溶液配制:
1。先將PH7.00同PH4.00藥粉分別倒入250毫升蒸餾水中,充分溶解,用兩支玻璃瓶密封保存,做 好標簽。
2 。在校正前,準備ORP標準溶液。
3 。86毫伏:取50至100毫升PH7.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。
4 。256毫伏:取50至100毫升PH4.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。 5。 ORP標準液保存期為72hour。
小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3磺胺间甲氧嘧啶(标准品)质量规格:含量测定Sulfamonomethoxine
VDR Others Human 人 VDR / NR1I1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 雷奈酸锶质量规格:HPLC>98%Strontium Ranelate
CM-R086大鼠*成纤维细胞完全培养基100mLGDC-0941质量规格:>98%,有效的PI3Kα/δ抑制剂GDC0941
Caki-1, 人肾透明细胞癌皮肤转移细胞 肌母细胞,L-6TG细胞 Cates-1B(人胚胎性癌细胞)L-165041质量规格:>98%,细胞可渗透的PPARδ激动剂L165041
小鼠肺腺癌细胞系;LA795磺胺(标准品)质量规格:熔点测定Sulfanilamide
HUVEC-12, 人脐静脉血管内皮细胞系Bathopxenanthroline4,7-二本基邻咯啉100毫克CP,97%
人Burkkit瘤细胞;Daudi 大鼠肾小球内皮细胞完全培养基 100mL本醇 BqNZYL cLCOHOL 100-21-6
MMQ 小鼠垂体瘤细胞葡聚糖凝胶 Sephade... Sephadex G-100 Superfine 9050-94-6 100G 分离试剂
FETUB Others Human 人 Fetuin-B / FETUB 人细胞裂解液 (阳性对照) AcidicProtease酸性蛋白酶100克生物技术级,1u/mg
人非小细胞肺腺癌细胞;NCI-H1975(顺二酸(马来酸))
酮粉试剂CL-0437SF763(人脑瘤细胞)5×106cells/瓶×2草甘膦标准溶液(10μg/ml,u=2%)N-(Phosphonomethyl)glycine solution质量规格:10μg/ml,u=2%
细胞名称 M-37细胞 G-7(小鼠骨骼肌肌肉母瘤细胞)辛(分析标准品,99%)Phoxim质量规格:分析标准品,99%
人细胞;Hela P10s-11F除草标准溶液(10μg/ml,u=5%)Nitrofen solution质量规格:10μg/ml,u=5%
DLL4 Others Human 人 DLL4 / Delta4 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-萘氧乙酸(标准品)2-Naphthoxyacetic acid质量规格:分析标准品
人急性母细胞性白血病细胞;MOLT-4灭菌丹标准溶液(100μg/ml,u=2%)N-(Trichloromethylthio)phthalimide solution质量规格:100μg/ml,u=2%
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,使用浓度为50-1000μg/mL。对于*次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定*筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) *天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养*;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,*将细胞稀释至丰度不过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。