使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,使用浓度为50-1000μg/mL。对于*次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定*筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) *天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养*;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
仅供科研实验、不得用于临床
产品名称 |
规格 |
货号 |
醋酸白试剂 |
100ml |
FS-R7734 |
分类:生化检测
储存条件:室温,避光,6个月
用途:检测尖锐湿疣、尖锐湿疣亚临床表现或HPV潜伏感染
注意事项:原理是由于HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的角蛋白不同,前者可被醋酸脱色变白而后者则不变白。
标准溶液配制:
1。先將PH7.00同PH4.00藥粉分別倒入250毫升蒸餾水中,充分溶解,用兩支玻璃瓶密封保存,做 好標簽。
2 。在校正前,準備ORP標準溶液。
3 。86毫伏:取50至100毫升PH7.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。
4 。256毫伏:取50至100毫升PH4.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。 5。 ORP標準液保存期為72hour。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
小鼠气管平滑肌细胞完全培养基 100mL盐酸丙美卡因质量规格:>98%,BRProparacaine HCl
EJ人膀胱癌细胞 Human bladder cancer cell line EJ 1640+10% FBSN-苄氧羰基-L-丝氨酸质量规格:>98.5%,BRZ-Ser-OH
IL36B Protein Mouse 重组小鼠 IL1F8 / IL36b 蛋白N-苄氧羰基-L-苏氨酸质量规格:0.98Z-Thr-OH
NCI-H23(人非小细胞肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 THP-1(单核细胞白血病)N-苄基甘氨酸质量规格:>98.0%,BRN-Benzylglycine
CL-0383MDA-MB-436(人癌细胞)5×106cells/瓶×2扎那米韦质量规格:>98%,BR,一水物Zanamivir
SUP-B15人Ph+急淋白血病细胞系 SUP-B15 acute lymphoblastic leukemia cell line Ph+ IMDM培养基(GIBCO)+20%FBS二苯基砜-4,4'-二氯-3,3'-二磺酸二钠(>98.0%(HPLC)(T))质量规格:>98.0%(HPLC)(T)Di Diphenylsulfone-4,4'-dichloro-3,3'-disulfonate
成纤维细胞生长因子双酚 C(>98.0%(GC))质量规格:>98.0%(GC)2,2-Bis(4-hydroxy-3-methylphenyl)propane
293FT(人胚肾细胞) 5×106cells/瓶×2 支气管成纤维细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)4,4'-异亚丙基二苯氧基乙酸(>98.0%(HPLC)(T))质量规格:>98.0%(HPLC)(T)4,4'-Isopropylidenediphenoxyacetic Acid
人心脏成纤维细胞cDNAHCF cDNA四溴双酚A(>98.0%(GC)(T))质量规格:>98.0%(GC)(T)Tetrabromobisphenol A
IL1RL1 Others Human 人 IL1RL1 / ST2 ( isoform A ) 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-乙酰氨基-2-脱氧-D-半乳糖醛酸质量规格:美国进口2-Acetamido-2-deoxy-D-galacturonic Acid
醋酸白试剂CL-0206SGC7901(人胃癌细胞)5×106cells/瓶×2草酸铵(98~101%,BR)Ammonium oxalate hydrate质量规格:98~101%,BR
MLF, 小鼠成纤维细胞5'-单1酸腺苷(>95%,BR)Adenosine-5'-monophosphate, free acid质量规格:>95%,BR
Sars结构蛋白表达株;293sars181A 人膀胱上皮细胞完全培养基 100mL硫酸铝十六水(>98%,BR)Aluminum sulfate, hexadecahydrate质量规格:>98%,BR
人急性早幼粒白血病细胞;HL-60葡萄糖-6-1酸脱氢酶,硫酸铵悬浮液Glucose-6-phosphate dehydrogenase质量规格:酶活>200 NADP units/mg,BC
PPP3R1 Others Human 人 PPP3R1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 苹果酸脱氢酶(>12,000U/ml,BC)Malate dehydrogenase质量规格:>12,000U/ml,BC
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,*将细胞稀释至丰度不过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。