使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,使用浓度为50-1000μg/mL。对于*次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定*筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) *天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养*;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
仅供科研实验、不得用于临床
产品名称 |
规格 |
货号 |
罗氏溶液 |
500ml |
FS-R7735 |
分类:生化检测
储存条件:4℃,6个月
用途:主要用于定性鉴定人、动物肝组织、肌肉组织等中酮体情况
注意事项:罗氏溶液是检测肝脏的生酮作用实验的成分,由氯化钠、氯化钾、氯化钙、葡萄糖等组成。罗氏溶液常与亚硝基铁*配合使用,生成紫色化合物,主要用于定性鉴定人、动物肝组织、肌肉组织等中酮体情况。
标准溶液配制:
1。先將PH7.00同PH4.00藥粉分別倒入250毫升蒸餾水中,充分溶解,用兩支玻璃瓶密封保存,做 好標簽。
2 。在校正前,準備ORP標準溶液。
3 。86毫伏:取50至100毫升PH7.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。
4 。256毫伏:取50至100毫升PH4.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。 5。 ORP標準液保存期為72hour。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
小鼠前胃癌细胞;MFC己二酸二丙酯(>99.0%(GC))质量规格:>99.0%(GC)Dipropyl Adipate
CXCL16 Others Canine 狗 CXCL16 / SR-PSOX 人细胞裂解液 (阳性对照) 壬二酸二甲酯(>98.0%(GC))质量规格:>98.0%(GC)Dimethyl Azelate
CM-R114大鼠视网膜微血管内皮细胞完全培养基100mL己二酸双(2-丁氧乙基)酯(>97.0%(GC))质量规格:>97.0%(GC)Bis(2-butoxyethyl) Adipate
KYSE70细胞,人食管鳞癌 神经胶质瘤细胞,SHG-44细胞 猪肾传代细胞;IBRS-2油酸乙酯(>70.0%(GC))质量规格:>70.0%(GC)Ethyl Oleate
CFPAC-1(人胰腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2己二酸二乙酯(>99.0%(GC))质量规格:>99.0%(GC)Diethyl Adipate
大鼠小肠隐窝上皮细胞完全培养基 100mL地红霉素,英文名或英文缩写:LY-237216,级别:BR,规格:5KU
A3人T细胞白血病细胞 The A3 of human T lymphocyte leukemia cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS氘代本并(A) BqNZO(c)cNTHRcCqNq D12 1718-23-
FGF1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 aFGF / FGF1 蛋白甜菜素,英文名或英文缩写:Betaine,级别:USP级,98%,规格:25毫克
B16-F1(小鼠色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 人星形胶质细胞HA3-[(N-三(羟甲基)甲基]-2-羟基丙磺酸,英文名或英文缩写:TAPSO,级别:IND,50%,规格:100克
人肺成纤维细胞cDNAHPF cDNAMaltExtractBroth 500g原装 BD 211320/Oxoid
罗氏溶液Sf-21(昆虫细胞) 5×106cells/瓶×2草酸铜(>97%,Tech Grade)Copper(II) oxalate hydrate质量规格:>97%,工业级
Gibco 12556-023 TM-C100 Supplem e,liquid 75ml无水硫酸铜(>99%,BR)Copper(II) sulfate, anhydrous质量规格:>99%,BR
人脊髓星形胶质细胞cDNAHA-sp cDNA肌1;肌酐Creatinine质量规格:>99%,BR
SCGB1A1 Others Human 人 SCGB1A1 / Uteroglobin 人细胞裂解液 (阳性对照) 酸性猩红7B(>70%,BS)Crocein scarlet 7B质量规格:>70%,BS
ACTE1 非洲爪蟾胚胎细胞酸性红44(BS)Crystal ponceau 6R质量规格:BS
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,*将细胞稀释至丰度不过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。