注意事项:
a.尽量减少反复冻融的次数,以免失效。 产品仅供科研实验、不得用于临床
b.基因转染到细胞内要一段时间才能表达出蛋白质, 所以筛选不能太早。
c. 筛选也不宜太迟,一般要在转染24h之后才开始加G418筛选。因为转染了外源基因
的细胞代谢负荷较大,增值较慢,时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没,*终导致筛选不出阳性克隆。
4. 随着细胞代谢,G418的浓度和活性都会下降,应每3~5天更换一次含有G418的筛选液,这时药物浓度可以降至200μg/ml。
5.加药筛选约5~7天左右,细胞会大量死亡,为了减少死亡细胞对阳性克隆的不利影响以及增加阳性克隆的得到率,可以应用套环法或刮除法结合有限稀释法来筛选阳性克隆。加药后,在高倍镜下,刮除阴性克隆,消化阳性克隆后继续筛选培养。或者用套环套住阳性克隆,在套环内加胰蛋白酶或EDTA消化,把消化液吸到另外一个新的孔中培养,*再用有限稀释法把阳性克隆在96孔板中筛选。
6. 一般经过4周左右的筛选,得到的阳性克隆都比较稳定。但是外源基因如果没有整合到基因组中的话,目的基因还是很容易丢失的,再次筛选往往是必不可少的,经过2次以上的筛选之后才能找到遗传稳定的细胞克隆。
7.尽量避免污染。
8.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品属性:
产品名称:李凡他试剂
规格:500ml
货号:FS-R7736
分类:生化检测
储存条件:室温,12个月
用途:用于定性检测浆膜腔积液中是否含有浆膜黏蛋白
注意事项:检测原理是在酸性条件下,浆膜黏蛋白可产生白色雾状沉淀,即Rivalta反应。有一定的腐蚀性,请注意小心操作。l
溶液的配制与的实验原理:
1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一种白色晶体粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室温溶解度为0.02g/100g H2O。
2、EDTA标准溶液的工作基准试剂,基准试剂的预处理:称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层,然后用水洗净,烘干。
配制步骤:
1、取适量锌片放在100mL烧杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自来水、纯水洗净,烘干、冷却。
2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15~0.2g Zn,盖好小表面皿。
3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地将溶液转移至250mL容量瓶中,用纯水稀释至标线,摇匀。
标准物质的管理:
(一)规范记录:
建立标准物质台帐,定期更新台账,明确责任主体,以便做到可以追本溯源;
领用时,记录好领用时的名称、数量、时间、领用人、发放人等必要的信息;
标准物质应在有效期内使用,应定期检查标准物质的有效期,对于限的标准物质要填写销毁登记表;建立标准物质档案。
(二)定期核查:
对于标准物质的种类、级别、介质、浓度含量、有效期、批号、环境条件、储存方法、帐物相符等等各参数,要定期核查。
定期检查实验室各检测项目所对应的标准物质是否相符。对新增检测项目所对应的标准物质应及时纳入规范管理。
存放环境条件和有效性。按标准物质证书上规定的环境条件,储存方法进行存放,及时检查是否过期。标准物质的储存环境应保证其特性完整不变。
标准物质所用介质和浓度是否满足检测方法对介质的要求。浓度是否合适,所用的介质对分析是否有影响。
小鼠腮腺细胞完全培养基 100mLL-谷氨酸5乙酯质量规格:0.985H-Glu(OEt)-OH
HUVEC[HUV-EC-C]人脐静脉内皮细胞 Human umbilical vein endothelial cells HUVEC[HUV-EC-C] DMEM+10%FBSN-乙酰-DL-亮氨酸质量规格:0.98N-Acetyl-DL-leucine
IL18BP Protein Mouse 重组小鼠 IL18BP 蛋白 (His 标签)N-碳苄氧基赖氨酸,N6-Cbz-L-赖氨酸质量规格:98%,BRN6-Cbz-L-Lysine
PA-1(人卵巢腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 H9c2(2-1)(大鼠心肌细胞)DL-赖氨酸质量规格:>98%,BRDL-Lysine
CL-0269CW-2(人结肠癌细胞)5×106cells/瓶×2DL-精氨酸盐酸盐质量规格:>98%,BRDL-Arginine Hydrochloride
NCI-H1395人肺腺癌细胞 Human lung adenocarcinoma cell line NCI-H1395 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS[Tyr9]- β-促激素 (猪)质量规格:>95%,BR[Tyr9]- β-MSH (porcine)
FAM3D Protein Human 重组人 FAM3D 蛋白 (His 标签)α-心钠素(1-28), human质量规格:>95%,BRα-ANF(1-28), human
293来源病毒包装细胞;ΦA 人上皮细胞完全培养基 100mLα-促激素质量规格:>95%,BRα-MSH
人髓核细胞RNAHNPC NAβ-淀粉样蛋白(1-42),人质量规格:>95%,BRβ-Amyloid Peptide (1-42), human
REG1A Others Cynomolgus 食蟹猴 REG1A / PSPS 人细胞裂解液 (阳性对照) [Nle8’18,Tyr34]-甲状旁腺激素(7-34)酰胺 (牛)质量规格:>95%,BR[Nle8’18,Tyr34]-pTH (7-34) amide (bovine)
李凡他试剂CRT(人神经胶质瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 肠静脉内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)草酸亚锡(>98%,BR)Tin (II) oxalate质量规格:>98%,BR
人脊髓星形胶质细胞HA-sp二氧化锡(> 99%,BR)Tin (IV) oxide质量规格:> 99%,BR
IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人细胞裂解液 (阳性对照) 硫酸亚钛(>98%,BR)Titanium (III) sulfate质量规格:>98%,BR
犬肾细胞;MDCK(NBL-2)硫酸钛(>96%,BR)Titanium (IV) sulfate质量规格:>96%,BR
801-D细胞,人巨细胞性肺癌细胞 转入Tet-off调控,含EGFP基因的CHO细胞,CHO-AA8细胞 CM-M026小鼠骨髓基质细胞完全培养基100mL柠檬酸三丁酯(>98%,BR)Tributyl 质量规格:>98%,BR