使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,使用浓度为50-1000μg/mL。对于*次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定*筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) *天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养*;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
仅供科研实验、不得用于临床
产品名称 |
规格 |
货号 |
茚三酮乙醇溶液 |
100ml |
FS-R7740 |
分类:生化检测
储存条件:室温,避光,6个月
用途:用于茚三酮反应或实验,定性蛋白质
注意事项:蛋白质与茚三酮反应,产生蓝紫色的还原茚三酮。
标准溶液配制:
1。先將PH7.00同PH4.00藥粉分別倒入250毫升蒸餾水中,充分溶解,用兩支玻璃瓶密封保存,做 好標簽。
2 。在校正前,準備ORP標準溶液。
3 。86毫伏:取50至100毫升PH7.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。
4 。256毫伏:取50至100毫升PH4.00標準溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分攪拌。 5。 ORP標準液保存期為72hour。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
小鼠肾动脉平滑肌细胞完全培养基 100mL硫酸新霉素质量规格:≥600 I.U. /mg,USP,BRNeomycin sulfate
LLC小鼠Lewis肺癌细胞 LLC mice with Lewis lung cancer cells DMEM+10%FBS硫酸新霉素(标准品)质量规格:效价测定Neomycin sulfate
IL12B Protein Mouse 重组小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白尼罗替尼(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Nilotinib
TE-10(人食管癌细胞) 5×106cells/瓶×2 HCC1428(人癌细胞)螺旋霉素质量规格:>3900IU/MG,EP,BR,可用于细胞培养Spiramycin
CM-M052小鼠子宫平滑肌细胞完全培养基100mL螺旋霉素(标准品)质量规格:含量测定,标准品Spiramycin
仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS5A 肺癌细胞,LLC Lewis细胞 PCK细胞,大黄鱼肾细胞拉罗皮兰,MK0524质量规格:>98%,BRLaropiprant,MK-0524
人葡萄膜色素细胞;UM盐酸头孢噻呋质量规格:>98%,BRCeftiofur hydrochloride
THPO Others Cynomolgus 食蟹猴 Thrombopoietin / THPO / TPO 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸头孢噻呋(标准品)质量规格:含量测定Ceftiofur hydrochloride
食管平滑肌细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)扎鲁司特质量规格:>99%,BRzafirlukast
DMP1 Others Human 人 DMP1 人细胞裂解液 (阳性对照) 阿昔洛韦钠盐质量规格:美国进口Acyclovir
茚三酮乙醇溶液HPAC细胞,人胰腺腺泡上皮癌 人舌癌细胞,T6细胞 杂交瘤(B类);C3110D2E11梣酮(标准品)Fraxinellone质量规格:HPLC≥98%,标准品
JEG-3(人绒毛膜癌细胞) 5×106cells/瓶×2茶黄素(标准品)Theaflavin质量规格:HPLC≥98%,标准品
Promocell C-25010 Hepatocyte Growth Medium, 肝细胞生长培养基(即用型) 500ml茶黄素-3'-没食子酸酯Theaflavin-3'-gallate质量规格:HPLC≥95%,标准品
人间充质干细胞(骨髓)cDNAHMSC-bm cDNA茶黄素-3-没食子酸酯Theaflavin-3-gallate质量规格:HPLC≥95%,标准品
FAP Others Human 人 FAP / Seprase 人细胞裂解液 (阳性对照) 柴胡皂苷A(标准品)Saikosaponin A质量规格:HPLC≥98%,标准品
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,*将细胞稀释至丰度不过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。