Bead Ruptor 24能够对各种样品类型进行快速而有效的组织匀浆。 Bead Ruptor 24能够使用优化的珠粒基质使多达二十四个样品的管尺寸从0.5mL到50mL均一化，以促进样品破坏。硬样本如肌肉，皮肤和骨骼是一个重大的挑战
用于提取目标分析物如蛋白质和核酸。
蛋白质是科学研究的重要目标。它们作为疾病的生物标志物，用于治疗目的的目标，并在生物体中提供基本的生理功能。样品蛋白质组的提取和回收往往是蛋白质组学研究的步。然而，组织成分变异性为开发通用提取方法创造了重大障碍。尽管软组织类型更容易被破坏，但是硬组织如骨骼，皮肤和肌肉很难快速破坏而不降解目标分析物。
传统的破坏方法可以包括在苛刻的化学品存在下孵育或在低温条件下粉碎。 1,2为了获得佳的蛋白质回收率，需要一种有效且可重复的方法，该方法在广泛的样品类型中是有效的。
在这里，我们证明通过在Bead Ruptor 24中的珠磨从韧性组织中提取蛋白质。
材料和方法
所有大鼠组织均获自Bioreclamation，Inc。将皮肤，尾巴，舌头和背部肌肉样品手动切片并放入装有5个2.8mm陶瓷珠（Cat＃19-628）的2mL增强聚丙烯管中。向每个管中加入1mL Tris-HCl，pH7.6，如表1中所述在Bead Ruptor 24上均化样品
匀浆的混合物立即以8,000g离心10分钟。使用1.2μl的上清液在Nanodrop分光光度计上测定280nm处的蛋白质浓度（表1）。
将10μl蛋白质提取物与5μlLaemmli样品缓冲液混合，在90℃加热10分钟，然后通过在4-20％Tris甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶上以200V电泳30分钟来分离蛋白质。蛋白质用考马斯染色并在GelDoc EZ系统（BioRad）上显现。
表1样本大小
和Bead Ruptor 24设置
样本类型速度周期
（mg）（m / s）时间（s）
皮肤（90）7.3 45 s
尾巴（70）6 45 s
舌头（90）7.45 3 x 30 s
背部肌肉（45）6 45 s
骨（250）6.95 8×45秒
（45秒停顿）
结果
从诸如皮肤和肌肉等韧性组织提取蛋白质是蛋白质组学研究的重大挑战和瓶颈。传统的方法如
因为化学裂解或cyromilling是不可复制和难以规模。在Bead Ruptor 24中支撑的珠粒加工提高了蛋白质提取的通量，并使强韧的生物组织均匀化。
在这项研究中，在Bead Ruptor 24中将大鼠皮肤，尾巴，舌头，肌肉和骨组织匀化，并通过分光光度量蛋白质产量。表2表明珠磨产生来自所有组织类型包括骨的高蛋白质产量。
蛋白质提取物进一步分离并通过SDS-PAGE显示（图1）。皮肤和尾巴产生非常相似的蛋白质库，因为这两种组织类型的相似之处在于尾巴主要由皮肤组织组成。舌组织，虽然需要大的力量来产生完全匀浆，产生了显着的蛋白质产量和其可视化蛋白质之间的大分子量变化（表2，图1）。
从骨骼样品中提取蛋白质是一个的挑战，通常通过化学脱钙过程来实现。在这项研究中，完全均化直接通过珠击实现，而不需要繁琐的化学裂解过程。高蛋白质产量和广谱蛋白质库均通过珠磨工艺实现（表2，图2）。
图2在坚韧组织上的蛋白质凝胶电泳。蛋白质提取物的聚丙烯酰胺SDS PAGE电泳。泳道1：蛋白质梯子。第2道：皮肤。第3巷：尾巴。第4道：背部肌肉。第5道：舌头。
图3骨蛋白提取物上的蛋白质凝胶电泳。骨蛋白提取物的聚丙烯酰胺SDS PAGE电泳。泳道1：蛋白质梯子。
泳道2：骨蛋白提取物。
泳道3：骨蛋白提取物的2X稀释。
泳道4：骨蛋白提取物的3倍稀释。
表2样品类型和蛋白质产量
样品类型蛋白质产量（μg/μL）
皮肤2.374
尾18.204
舌1.286
背部肌肉14.395
骨0.722
结论
Bead Ruptor 24有助于从坚韧的组织和骨骼中快速提取蛋白质。珠磨消除了对强酸或昂贵缓冲系统的需求，并提供了可再现的均质化。
参考
江X等高效蛋白质的方法开发
