细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。
Annexin V是一种Ca+依赖的磷脂结合蛋白，初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白，Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性。对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。因此，可以建立一种用Annexin V结合在细胞膜表面作为凋亡的指示并结合一种染料排除试验以检测细胞膜的完整性的检测方法。
检测步骤：
1、贴壁细胞加胰酶（不加EDTA,因为EDTA可与Annexin-V结合，影响实验）消化，收集（1~5）×106/mL,离，悬浮细胞直接收集离心。
2、用冷的PBS洗细胞2遍。
3、加入1×binding buffer 100ul重悬细胞,细胞浓度为1*10＾6/ml;
4、加入5ul Annexin-V 和10ul PI，混匀，室温避光15min染色。
5、加入1×binding buffer 400ul 置于冰上，上机检测
