Total RNA Isolation Regeant（RNA 提取试剂）
产品简介：
l Total RNA Isolation Regeant（TRI Regeant）是一种用于细胞或组织RNA 抽提的试剂。本产品采用和 Invitrogen公司的 Trizol相似的原理和方法，抽提的方法和步骤完全相同。
l TRI Regeant 对动植物细胞或组织及细菌的RNA 抽提均适用。
l TRI Regeant 可以抽提长达15 kb 的RNA，也可以抽提microRNA 等小RNA。抽提小RNA 时宜-70℃沉淀过夜。
l TRI Regeant 抽提所得RNA 无DNA 和蛋白污染。一般所得RNA 溶于DEPC 水后的A260/280 值为1.8-2.0。
l 每一百万细胞可得 5-15µg RNA；每毫克组织可得 1-10µg RNA。产量因细胞和组织不同而异。
l TRI Regeant 抽提所得RNA 可直接用于Northern，点杂交，纯化mRNA，体外翻译，RNase protein assay，cDNA 克隆，以及RT-PCR，也可用于基因表达芯片分析，高通量测序等对RNA 质量较高的情况。
使用说明：
1. 细胞裂解或组织匀浆。
a. 贴壁细胞
吸尽培养液，每 10平方厘米细胞加入 1ml TRI Regeant。一般六孔板每孔加 1ml，12孔板每孔加 0.5ml。晃
动 3-5下，再用枪吹打 2-3下，确保全部裂解，然后吸至离心管中。
b. 悬浮细胞
离心收集细胞，吸尽液体，每五百万至一千万动植物或酵母细胞，或一千万细菌，加入 1ml TRI Regeant。
用枪吹打或适当 vortex，确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，确保全部裂解。
c. 组织
先将组织剪切成小块，放入普通玻璃匀浆器内。每 50mg-80mg组织加入 1ml TRI Regeant，匀浆。对于 RNA
完整性要求比较高的情况，先液氮冷冻组织块，然后在低温下用研钵研碎组织，随后再加入 TRI Regeant
进行 RNA提取。
2. 对于某些蛋白，多糖或脂含量很高的细胞或组织，TRI Regeant 裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。
需 12000g 4℃离心 10分钟，然后吸取澄清的裂解产物至一新的离心管中。
3. 室温放置 5分钟，使样品充分裂解。
4. 每毫升 TRI Regeant加入 0.2ml氯仿，vortex混匀或猛烈晃动 15秒，室温放置 2-3分钟。
5. 12000g4℃离心 15 分钟，然后吸取含RNA 的上层无色水相至一新的离心管中，每毫升TRI Regeant l
约可吸取 0.5-0.55 ml。
6. 按每毫升初的 TRI Regeant加入 0.5ml异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀 10分钟。如果希望提取 microRNA
等小 RNA，-70℃沉淀过夜。
7. 12000g4℃离心 10 分钟，在管底可见RNA 沉淀，弃上清。
8. 每毫升初的 TRI Regeant加入 1ml 75%乙醇(DEPC水配制)，vortex或颠倒混匀，
9. 7500g4℃离心 5 分钟，弃上清。再用离心机甩一下（>5000rpm 离心1 秒），小心吸尽液体。
10. 待 RNA略干后，加入 20µl DEPC水溶解，-70℃冻存。注意：切勿让 RNA过分干燥，否则将极难溶解，
且测出的 A260/280值会低于 1.6。
保存条件：常温保存，一年有效。
注意事项：
Ø 需自备氯仿，异丙醇，DEPC，75%乙醇(DEPC水配制)，和 DEPC水。
Ø 所有离心管，枪头及相关溶液都必须无 RNA酶污染。耐高温器物可 150℃烘烤 4小时以去除 RNA酶，其它器物去除 RNA酶可考虑用 0.01%的 DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。溶液需用 DEPC水配制。
加 0.01%(体积比) diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或 MiliQ级水中，处理过夜，灭菌即成 DEPC水。
Ø 使用冻存的细胞或组织抽提 RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过 程中一些细胞或组织内的 RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提 RNA，先加入适量
TRI Regeant，并裂解样品后冻存。
Ø 必须戴一次性手套操作，且尽量不要对着 RNA样品说话，以防 RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。
Ø TRI Regeant 含有毒物质苯酚，避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触 TRI Regeant，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请听取医生意见。
Ø TRI Regeant 抽提RNA 的同时，理论上也可抽提蛋白和DNA，但未经测试。有兴趣者可按Invitrogen 公司的 TRI Regeant的操作步骤进行操作。
Ø 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
