磺胺甲氧哒嗪残留检验的薄层色谱测定方法

1)试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯为蒸馏水。:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" />

1.乙酸乙酯

2.二氯甲烷

3.正己烷

4.三氯甲烷

5.特丁醇

6.甲醇

7.丙酮

8.浓盐酸：密度约1．:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" />19g／ml

9.氢氧化钠溶液：10mol／L水溶液

10.荧光胺溶液：30rug荧光胺溶于250ml丙酮中，可用于6～9块展开板

11.二乙胺

12.展开溶剂：三氯甲烷—特丁醇(80+20)，当日新配

13.甘氨酸缓冲液：0．2mol／I水溶液。使用前用10mol／L氢氧化钠溶液调pH值达到12．25(本步骤需在使用前、在20C室温的蒸气浴上进行)。

14.磷酸盐缓冲液：2mol／L水溶液。用2mol／I的磷酸二氢钾与2mol／I。的磷酸氢二钾合，得到pH为5．25的缓冲溶液。

15.盐酸(1．7mol／L)—磷酸盐缓冲溶液(2mol／L，pH 5．25) (1+1)。

16.磷酸盐缓冲液

17.磺胺甲氧哒嗪标准晶：纯度≥99％。

18.磺胺甲氧哒嗪标准贮备液(1mg／m1)：准确称取100rug磺胺甲氧哒嗪(至0．1mg)于100ml容量瓶中，用丙酮溶解并定容后存放在聚乙烯瓶中，于一10~C保存可使用

一个月。

19.内标贮备液(1mng／ml)：准确称取100mg磺胺吡啶(至0．1ing)于100ml容量瓶中，用丙酮溶解并定容后存放在聚乙烯瓶中，于一10C保存可使用一个月。

20.磺胺甲氧哒嗪标准工作液(10／ug／ml)：移取标准储备液lml于100mi容量瓶中，加pH 7．6的缓冲溶液至刻度。

21.内标工作液(10／ug／ml)：移取内标贮备液lml于100ml容量瓶汇中，加pH 7．6的磷酸盐缓冲溶液16.至刻度。

22.内标工作液(2．50ug／ml)：移取内标工作液(10txg／mi)25ml于100ml容量瓶中，用pH 7.6的磷酸盐缓冲溶液⑩稀释至刻度。

23..标准溶液A：含5．00ug／ml的磺胺甲氧哒嗪和2．50ug／mI内标工作液。移取50mL磺胺甲氧哒嗪标准工作液(10ug／ml)和25ml内标工作液(10ug／ml)于100ml容量瓶中，用pH 7．6的磷酸盐缓冲溶液16.稀释至刻度。

24.标准溶液B：含2．50ug／ml磺胺甲氧哒嗪和2．50ug／ml内标工作液。移取25ml标准

溶液A于50ml容量瓶中，用内标工作液(2．50／~g／mi)稀释至刻度。

25.标准溶液C：含1．25ug／ml磺胺甲氧哒嗪和2，50ug／ml内标工作液。移取25ml标准

溶液B于50ml容量瓶中，用内标工作液(2．50ug／ml)稀释至刻度。

(2)测定步骤

①提取 称取约2．5g试样(至0．1g)置于50ml离心管中，加入100L内标工作液。另称取不含磺胺甲氧哒嗪的空白试样3份，分别加入磺胺甲氧哒嗪标准溶液A、B和C各100FI。(相当于试样中添加磺胺甲氧哒嗪的量分别为o．2mg／kg、0．1mg／kg、0．05rug／kg)。静置15min后，加入25ml乙酸乙酯，搅拌lmin，盖上螺旋盖，于卧式振荡器上以约250r／min振荡20min。于2500r／min离心5min后，将上清液转移到另一50ml离心管中。弃去残渣。

②净化 向上述离心管中加入2ml甘氨酸缓冲溶液，振荡5min，于2500r／min离心5rain，除去上层有机层。再加2ml磷酸盐缓冲溶液，使pH值达到5．25±0．1[必要时用氢氧化钠溶液(1．0mol／L)或盐酸溶液(1．0mol／L)调节pH)。

加5ml正己烷，振荡5min，于2500r／111111离心5min，弃去上层有机层。加入10ml二氯甲烷，振荡5min，于2500r／rain离心5min(如有乳化时，于3500r／rain离心10min)。将离心管倾斜，吸除上层水相。注意清除界面处的油脂和杂物。如在水和有机相之间存在凝胶状物，不要除去，以免降低回收率。加10PL二乙胺至二氯甲烷中，于40~C氮气流下，蒸发至近干(切勿蒸干)。蒸发时当二氯甲烷液面降至5ml时，用约2ml二氯甲烷洗涤试管内壁；降至2．5ml时，再洗涤1次；降至1．0～1．5mi时，再洗1次。将残渣溶解在100gL甲醇中，旋转混匀30s，静置，使不溶物沉淀于试管底。溶液供测定用。

③测定

a.薄层色谱扫描条件

光源：氙灯

激发波长410nm；发射波长410nm，或根据不同型号的仪器选择不同的滤光片

激发狭缝与发射狭缝：可根据斑点大小进行调节

检测方式：反射荧光

扫描方式：线性扫描

b.测定 将点样器调至85 C，分别点20ul-样液和加有磺胺甲氧哒嗪及内标物标准液的试液到薄层板上。按下法进行点样：于距薄层板的底边约1．o～1．5cm的底线上，距左边约lcm处开始，每隔lcm顺序点样：样液，标准液(o．10rug／k8)，样液，样液，标准液(0．05rug／k8)，样液，样液，标准液(o．2mg／k8)，样液。共点6个样液。

用甲醇作展开剂，展开薄层板至前沿距甲醇液面达lcm时，取出薄层板置于烘箱(100~C)干燥1rain。然后在盛有三氯甲烷—特丁醇(80+20)混合液的饱和展开槽中展开，至前沿距液面6cm处。取出，置于烘箱(100℃)干燥lmin。

将层析板完全浸没于荧光胺溶液l一2s，然后置于室温暗处15—30rain后，在紫外灯下观测，测量各斑点的只f值。在上述色谱条件下，磺胺甲氧哒嗪的兄值约为o．83，磺胺吡症的疋f值约为o．71。然后按上述扫描条件进行薄层扫描。

(3)灵敏度和回收率

本方法的测定低限为20mg／kg。

在0．02～0.20mg／kg添加浓度水平上，回收率范围为89．3％～96．5％