高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于 100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要。
现今常用的预排气方法，是关闭放气阀，通电后，待压力上升到0.05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀，升压灭菌。另外，国内某些厂家是利用排气阀芯的重量来进行预排气。排气阀竖直安装，当缸体内压力小于某一值时，阀芯由于重力原因自然下垂，缸体内的气体由排气阀排出缸体。当缸体内压力大于某一值时，足以将阀芯顶起，从而关闭排气阀，加压开始。这样的方法对阀芯的制造精度要求很高，往往达不到很好的效果。另外值得注意的一点是，排气过程中若使压力降低太快，会引起激烈的减压沸腾现象。
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